一、原理及特点

（一） 原理

抗酸杆菌细胞壁中分枝菌酸在苯酚的渗透性助染作用下，与首染染料中金胺O牢固结合，能够耐受酸性乙醇的脱色，在荧光显微镜下呈现黄绿色或橘黄色荧光，非抗酸杆菌和绝大多数人体细胞由于细胞结构和菌体成分的限制，在首染染料染色后，容易被酸性乙醇脱色，经复染后无荧光或很弱的荧光，可以此区分。

（二） 特点

由于荧光染色一般于200 ～400倍镜检，而抗酸染色则于1 000倍镜检。镜检时相同时间内荧光镜检染色观察的视野较抗酸染色范围广（4 ～10倍），所以荧光染色敏感度较好，此外荧光染色法将抗酸杆菌于黑色背景下染成橘黄色或黄绿色的菌体，而抗酸染色将抗酸菌于蓝色背景下染成红色菌体，显然荧光染色法较易于观察。荧光染色的涂片应于24 h内镜检，否则荧光可能会减弱。本实验室涂片经贝索荧光染液染色后，涂片1周之内镜检质量可保证。

（三） 荧光染色注意事项(https://www.daowen.com)

1.金胺O浓度为1/5 000 ～1/1 000时，加罗丹明B能增强荧光性。

2.脱色液盐酸浓度以0.5%为佳，如加0.5 g氯化钠效果更好。

3.用高锰酸钾溶液复染超过2 min，能使荧光减弱，有时可用亚甲蓝作为复染液。标本直接涂片或标本经NaOH处理后涂片，推荐使用高锰酸钾溶液复染，背景干净易观察，若用亚甲蓝复染，标本中细胞背景很亮，阳性易漏检；标本经次氯酸处理的涂片，推荐使用亚甲蓝复染，可显著减少非特异性荧光。如果遇到一种复染液复染后，镜检背景不理想，可直接再滴加另一种复染液染色1 min，背景会有改善，不影响阳性结果。

4.氯化镁能增强荧光亮度。

5.少数铜绿假单胞菌会显示弱荧光性。