三、实验准备
(一) 仪器、设备和耗材
1.微生物实验室专用生物安全柜。
2.涡旋振荡器。
3.能容纳50 ml离心管的冷冻离心机(>3 000 g)。
4.可调微量加样器(200 ~1 000 μl),接种环。
5.一次性50 ml有螺旋盖的离心管及配套试管架。
6.一次性无菌塑料滴管。
(二) 试剂
1.样本前处理液 4% NaOH溶液,2.9%枸橼酸钠溶液,N—乙酰—L—半胱氨酸(NALC)及无菌PBS缓冲液(pH6.8),配制方法同固体培养所用试剂。
2.MGIT 分枝杆菌生长指示培养管(7 ml)含7 ml改良Middlebrook 7H9培养肉汤,荧光显示剂,10% CO2。(https://www.daowen.com)
3.MGIT营养添加剂(OADC) 为15 ml液体试剂,主要含以下五种成分。
(1) 油酸(Oleic Acid):是分枝杆菌新陈代谢过程中的基础营养物质。
(2) 牛血清蛋白(Albumin of Bovine):结合游离脂肪酸,保护分枝杆菌,促进生长。
(3) 右旋糖酐(Dextran):分枝杆菌生长能量的来源。
(4) 触媒(Catalase):分解不利于分枝杆菌生长的过氧化物。
(5) 多氧乙烯基硬脂酸盐(POES):促进结核分枝杆菌生长,保持菌种稳定。
4.BBL MGIT 杂菌抑制剂(PANTA)为冻干试剂,是五种抗生素的混合物,分别为:多黏菌素B (Polymixin B)、两性霉素B (Amphotericin B)、萘啶酸(Nalidixic acid)、甲氧苄啶(Trimethoprim)、阿洛西林(Azlocillin),可有效抑制或杀灭培养物中的污染杂菌。
5.标本接种试剂准备 以15 ml营养添加剂溶解杂菌抑制剂,颠倒混匀待充分溶解,接种标本前取0.8 ml该液体至MGIT培养管,剩余试剂于2 ~8℃冰箱保存,可保存5 d。
6.试剂的保存 MGIT培养管室温存放,不可冷冻,如培养管出现混浊现象,不可使用。使用前应检查有效期。添加剂于2 ~8℃冰箱保存,避免冰冻或过热。生长添加剂打开后应尽快用完,尽量避光保存。