七、室内质控

七、室内质控

(一) 人员

应固定1 ~2名接受过严格培训的技术人员进行分离培养,并严格按照标准操作程序操作,做好室内质量控制。

(二) 设备设施

最好配备5%~10% CO2培养,温度(35±1)℃和(30±1)℃(用于皮肤软组织的培养),每日观察记录培养箱温度和二氧化碳浓度,防止温度或二氧化碳浓度失控,影响培养阳性率。

(三) 培养基

1.颜色 培养基颜色鲜艳,中性罗氏培养基为绿色,若同一批制作的培养基呈现不同的颜色可能是由于混匀不充分,若颜色为深蓝色可能是由于孔雀石绿过多或者pH太低(呈酸性);深黄色表明培养基中孔雀石绿质量不好或者pH太高(呈碱性);如果培养基颜色灰暗,过蓝或过黄,均不能使用。

2.质地 如果培养基液化或者很容易碎裂,可能是由于凝固温度太低或者时间过短。可随机抽取一批培养基中的1 ~2支培养管,在手上敲打检测,当培养管转动时培养基应不能够转动,质地较差的培养基不适合于培养接种。

3.凝固水 培养管的底部应该有少量凝结水,但过多的水表明在凝结后过早将螺旋盖旋紧,或者由于培养基的成分量不标准,接种前应倾去过多的凝结水。(https://www.daowen.com)

4.匀质性 培养基中出现了较大块状物,表明匀质性较差。

5.无菌试验 抽取2%~5%新批号培养基置于(36±1)℃孵育,48 h后观察是否有细菌生长。培养基斜面无培养物生长,即为无菌性测试合格。如果发现任何一支培养基有培养物生长,则将同一批次的所有培养基置(36±1)℃孵育48 h,逐一检查培养基,弃去有细菌生长的培养管,没有培养物生长的培养管拧紧螺旋盖保存备用,填写培养基验证记录。

6.生长试验 一般情况下,使用保存的结核分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌标准菌株进行生长试验。大肠埃希菌可以检测选择性培养基的抑菌效果。挑取菌落至磨菌容器,加入无菌生理盐水1 ~2滴,研磨后加入生理盐水制备0.5麦氏单位菌悬液。使用校准的接种环或移液管取10 μl菌液进行接种。在35 ~37℃、5%~10%的CO2中孵育,培养21 d。结核分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌在所有培养基上生长,阴性对照物大肠埃希菌ATCC 25922部分或完全抑制。

7.阴性质量质控 每月用5 ml pH6.8磷酸缓冲液作为阴性质控,随当日标本同步进行消化、去污染处理、接种,培养结果为阴性,证明实验室不存在交叉污染。

8.过度消化监控 戈登分枝杆菌的分离率可作为消化去污染处理的参考,一般而言,本菌的分离率约10%,由于戈登分枝杆菌对消化去污染剂的敏感度较结核分枝杆菌强,若戈登分枝杆菌的分离率低于5%,即表示去污染力过强。

9.培养基使用期限 有效期内使用。

10.培养基的储存 ① 所有培养基均应防止光线直接照射。② 将平板培养基以干净塑料袋或无菌干燥容器保存。③ 试管培养基储存时应将盖子盖紧。④ 将所有培养基冷藏以防止蒸发脱水。⑤ 丢弃被污染或脱水的培养基。