吡嗪酰胺药敏培养基

二、吡嗪酰胺药敏培养基

吡嗪酰胺(PZA)是抗结核治疗的一线药物,药敏结果对临床有指导性意义。加入一定浓度PZA药液到7H10琼脂培养基内,采用比例法可检测MTB的耐药性。

1.7H10基础琼脂培养基的制备 见本书第213页表13—1—6—1。

2.含药培养基的配制 PZA药粉的溶解与效价计算见前文第222 ~223页“一、固体药敏培养基”制备介绍。

(1) 基础液配方:见表13—4—2—1。

表13—4—2—1 吡嗪酰胺(PZA)药敏培养基基础液配方

图示

1) 取2个5 000 ml蓝盖试剂瓶(A、B瓶,内放搅拌子);按上述配制B瓶,A瓶在B瓶的基础上加多240 ml纯水;搅拌均匀后121℃灭菌10 min。

2) 灭菌后立刻转入洁净室内,放于50℃水浴箱中。

3) 在超净工作台上放置一台加温磁力搅拌器,调温度为60℃,先将A瓶放于其上,搅拌中0.22 μm过滤加入240 ml OADC增菌液(预温40℃),搅拌10 min。

4) 边慢速搅拌边用分装器在A、B格每格分装5 ml,为对照观察格;分装完后,用无菌热水冲洗分装器。(https://www.daowen.com)

5) 将1瓶B瓶放于加温磁力搅拌器上,搅拌中0.22 μm过滤加入240 ml PZA 3 mg/ml(预温50℃)、240 ml OADC增菌液(预温40℃),搅拌10 min,PZA的药物终浓度是100 μg/ml。

6) 边慢速搅拌边用分装器在C、D格每格分装5 ml,为含药观察格;分装完后,用无菌热水冲洗分装器。

7) 冷却后放入透气袋中。

8) PZA药敏检测培养基pH为6.0,适合该药敏的检测。

3.培养基的保存 质量合格的培养基,注明日期后分装于防潮包装内,4℃保存。保存期不能超过4周。

4.注意事项 注意培养基的pH应为6.0方可适合PZA药敏的检测。

5.质量控制

(1) 冷却后的整批培养基或抽取一部分,置于37℃孵育24 h进行无菌试验。对质量不合格的培养基,如出现气泡、干涸、量不足及发生污染等,必须废弃。

(2) 每批培养基应抽取部分接种质控菌株(结核分枝杆菌H37RV标准株,ATCC27294)10—3 mg,观察生长情况,以确定培养基质量:对照培养基菌落数在200个或占A或B格2/3以上,含药培养基无生长,为敏感。

(蔡杏珊)