二、病原学
(一)分类分型
1969年首次分离、鉴定拉沙病毒,并以分离地尼日利亚博尔努洲拉沙镇命名。拉沙病毒属于沙粒病毒科(Arenaviridae)沙粒病毒属(Arenavirus)。沙粒病毒为负链分节段的RNA病毒,病毒颗粒呈球形或多样形,直径80～150 nm,具有囊膜,电子显微镜下囊膜的纤突显示为若干沙粒样电子致密体,沙粒病毒因此得名。沙粒病毒有20余种血清型,其中6种在西非、阿根廷、玻利维亚、委内瑞拉、巴西和美国引起严重出血热(表2-10-1)。根据沙粒病毒抗原物质和地理分布的不同,将沙粒病毒分为旧世界沙粒病毒(old world arenaviruses)和新世界沙粒病毒(new world arenaviruses)两大群,拉沙病毒在旧世界沙粒病毒群内。
表2-10-1 沙粒病毒科主要成员及其所致人类疾病
引自:Centers for Disease Control and Prevention.Arenaviridae.Viral Hemorrhagic Fevers(VHFs).http://www.cdc.gov
(二)形态特征
拉沙病毒的核酸是两节段单股双义负链RNA,大节段称为L RNA,长度7 200 bp,相对分子质量约2.2～2.8×106,小节段称为S RNA,长度3 400 bp,相对分子质量约1.1×106。长L链的两个基因编码病毒RNA依赖RNA聚合酶(L蛋白)和锌结合基质蛋白(Z蛋白),短S链的两个基因编码核蛋白(NP)和包膜糖蛋白前体(GPC)。NP和L蛋白跟RNA组成核蛋白,或为核衣壳一部分。一般认为Z蛋白作为基质蛋白参与形成病毒颗粒。GPl和GP2由其前体——糖蛋白C(GPC)经蛋白酶SKI-I/SIP裂解而来,GPl是作为受体结合部位的表面糖蛋白棘突的一部分,GP2与其他包膜病毒跨膜融合蛋白有一致结构(图2-10-1,图2-10-2)。
图2-10-1 拉沙病毒电镜像(https://www.daowen.com)
(引自:Fehling SK,Lennartz F,Strecker T.Multifunctional Nature of the Arenavirus RING Finger Protein Z.Viruses 2012,4,2973-3011.)
图2-10-2 拉沙病毒结构模式
NP:核蛋白;GP:包膜蛋白
(三)理化特征及抵抗力
1.培养特点 常用非洲绿猴肾细胞(Vero E6)细胞培养法和乳鼠脑内接种分离法分离培养该病毒。拉沙病毒可使细胞融合病变,在培养的过程中要应用免疫荧光法(IFA)每天观察细胞病变情况。动物接种可选择新生小鼠进行脑内接种,一般在感染后4～7天出现弓背、竖毛、嗜睡、眼睑炎、头部水肿等体征,可解剖鼠脑,以备传代或转种细胞培养。动物培养较细胞培养敏感性高,但阳性率低而且易受接种毒株、接种途径、接种动物的年龄等诸多因素的影响。
拉沙病毒可感染多种动物,如小鼠、仓鼠、豚鼠、恒河猴、几内亚猪等。
2.理化特性和抵抗力 拉沙病毒在体外不稳定,对理化因素的抵抗力较弱,对酸、热、紫外线、脂溶剂(乙醚、三氯甲烷、丙酮、苯等)、去污剂等敏感。紫外照射、高压消毒、焚烧或煮沸等方法可以灭活拉沙病毒。0.1%～0.15%β丙内脂可完全灭活,并保留其抗原性。含有拉沙病毒的血清可以在60℃下热处理1小时灭活。病毒气溶胶在较低的湿度下(30%RH)比较稳定,在-70℃或冷冻干燥条件下能长期保存病毒活性。