(二)方法与结果
1.色谱条件色谱柱 SgilentSB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(洗脱程序见表1);体积流量为:1.0mL/min;检测波长250nm;柱温30℃;进样量20μm。
2.供试品溶液的制备
对照品溶液的制备 分别精密称取一定量的补骨脂素、花椒毒素、欧前胡素、异欧前胡素、(8E)-1,8-Heptadecadiene-4,6-diyne-3,10-diol、法卡林二醇、人参炔醇对照品,置10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,制成补骨脂素0.0050mg/mL、花椒毒素0.0050mg/mL、欧前胡素0.0025mg/mL、异欧前胡素0.0050mg/mL、(8E)-1,8-Hepta-decadiene-4,6-diyne-3,10-diol.1000mg/mL、法卡林二醇0.2000mg/mL、人参炔醇0.2500mg/mL的标准品溶液,备用。
取不同产地的北沙参药材粉末各2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%乙醇15mL,密塞,称定重量,超声(250W,40KHZ)提取45分钟,放冷,再称定重量,用75%乙醇补足减失的重量,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,即得。
3.方法学考察
(1)线性关系 精密吸取各对照品溶液若干毫升,配成一系列浓度的标准溶液。在上述色谱条件下分别进样29uL,测定其峰面积A,以浓度(C)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线。
(2)精密度试验 精密吸取供试品溶液20uL,连续进样6次,分别测定7个待测组分的峰面积,供试品溶液中待测组分的RSD。结果表明:该方法精密度良好,符合含量测定要求。
(3)稳定性试验 取供试品溶液,分别于0、2、4、8、12、36小时进样,进样量为20uL,测定峰面积A。
(4)重复性试验 取供试品2g,精密称定,共6份,分别按供试品溶液制备方法制备,并测定含量。结果表明:该方法的重复性好,符合含量测定要求。
(5)加样回收试验 取已知含量的供试品9份,每份2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,按供试品溶液中待测组分含量的80%、100%、120%精密加入各对照品一定量,按上述供试品溶液制备方法制备,分别测定,计算回收率,结果表明:该方法的准确度良好,符合含量测定要求。
(6)耐用性实验 取供试品2g,精密称定,按供试品溶液制备方法制备,分别在4个不同柱温条件25、28、30、33℃下测定含量,同一温度下进样2次,各待测组分的;取同样的供试品,分别在SgilentSB-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)、CNWAtnenaC18柱(250mm×4.6mm,5μm)、CNWAtnenaC18柱(150mm×4.6mm,5μm)3种不同色谱柱条件下测定含量,结果表明:该方法的耐用性良好,符合含量测定要求。
4.样品的含量测定 取不同批次供试品约2g,各3份,精密称定,按供试品溶液制备方法制备,吸取供试品溶液20uL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积A,计算各待测组分的含量,从结果中可以看出香豆素的含量相对偏低,均小于万分之二。而聚炔类成分的含量相对较高,尤其是人参炔醇;从产地来看,来源于赤峰的北沙参聚炔类成分的含量较高,山东的含量偏低。测定结果表明不同产地的北沙参药材在有效成分含量方面存在较大的差异。
本文采用HPLC检测方法,对北沙参中的香豆素与聚炔类成分进行多组分定量。有效地确定了北沙参药材质量中药效成分的含量,为考察北沙参药材质量的优劣提供了方法依据。此外,本文创新性地测定了不同产地来源的北沙参药材中药效成分的含量,通过比较得出不同产地的北沙参药材品质差异明显。