（二）方法与结果
1.浙麦冬总黄酮含量的测定
（1）供试品溶液的制备 取浙麦冬块根和须根碎粒各5.0g，分别置索氏提取器中，加6倍量70%的乙醇提取2次，每次1小时，合并提取液，提取液减压浓缩至1/10体积，加3%硫酸30mL水解，加乙醇溶液置含醇量20%，冰箱静置过夜，滤过后加1mol/L氢氧化钠中和，再加乙醚脱脂5次，以2mol/L盐酸调节pH至5左右，再以氯仿萃取4次，回收氯仿至干，用70%乙醇定容至100mL容量瓶中得供试品液，备用。
（2）对照品溶液的制备 精密称取经105℃干燥至恒重的芦丁标准品12.5mg，置50mL容量瓶中，加少量水，超声使溶解，定容，摇匀，即得浓度为2.5μg/mL的对照品溶液，备用。
（3）最大吸收波长的选择 分别吸取对照品和供试品溶液各0.5mL置25mL量瓶中，加30%乙醇至10mL，加5%亚硝酸钠1.0mL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝1mL，摇匀，放置6分钟，加10%氢氧化钠4mL，加30%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15分钟，以随行试剂为空白，在400～600nm波长范围内进行光谱扫描，结果对照品和供试品在495nm处呈现最大吸收峰，故确定检测波长为495nm。
（4）标准曲线的制备 分别精密吸取标准品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL置于25mL容量瓶中，按（3）项方法显色操作，以随行试剂为空白，于495nm波长处测定其吸光度，以芦丁标准品的浓度（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：Y=9.3729X+0.0008，r=0.9999，芦丁标准品在0.01～0.10mg/mL范围内线性关系良好。
（5）精密度试验 从同一份浙麦冬样品制备液中量取相同量溶液5份，按照（3）方法平行测定麦冬总黄酮的含量，测得精密度RSD=0.29%，表明精密度良好。
（6）重复性试验 取同一份麦冬样品碎粒，连续称取5次，分别按供试品溶液制备和（2）项下方法操作，测定每份含量，结果RSD=0.82%。
（7）稳定性试验 取同一对照液，按（3）项方法显色操作，每隔2小时测定一次，结果6次测定的吸收值基本不变，RSD=0.27%，表明供试品溶液至少在12小时内稳定。
（8）加样回收率试验 精密称取已知麦冬总黄酮含量的样品6份，分别精密加入等量芦丁对照品，按样品制备法制备，并按（3）项方法显色操作，495nm处测定吸收值，代入标准曲线方程，计算出平均回收率98.17%，RSD=2.17%（n=6）。
2.浙麦冬总皂苷含量的测定
（1）供试品溶液的制备 取浙麦冬块根和须根碎粒各5.0g，置索氏提取器中，加6量的甲醇于90℃水浴中提取4小时，滤过，以2000r/min离心10分钟，回收甲醇至干，残渣用水超声混悬，用乙醚萃取2次，弃去乙醚层，再以水饱和的正丁醇萃取3次（20mL，10mL，10mL），合并正丁醇层，用氨水溶液萃取2次，正丁醇液回收至干，用甲醇溶解并定容至25mL，备用。用层析柱（1.5cm×15cm）内装3cm40～60目D101大孔树脂，上加1cm中性Al2O3，在已处理好的D101大孔树脂柱精确加入1mL的样品溶液，吸附时间≥2小时，先用0.1mol/L的NaOH溶液200mL冲洗，再用蒸馏水洗至无糖，弃去洗脱液，再用70%乙醇洗脱至无皂苷，收集70%乙醇洗脱液于蒸发皿中水挥干，残渣加甲醇溶解，定容于10mL容量瓶中，以此作显色用。
（2）对照品溶液的制备 精密称取经105℃干燥至恒重的麦冬皂苷D对照品5.02mg，加甲醇，超声使溶解，定容至50mL容量瓶，摇匀，即得浓度为1.004μg/mL的对照品溶液，备用。
（3）最大吸收波长的选择 分别吸取对照品和供试品溶液各5.0mL于具塞试管中，水浴挥干，加5%香草醛-冰醋酸溶液（现用现配）0.2mL，高氯酸0.8mL，摇匀密置，于60℃水浴加热15分钟，取出，冰水浴5分钟终止反应，加冰醋酸5.0mL，摇匀，以相应试剂为空白，在350～500nm处扫描，结果对照品和供试品在390nm处呈现最大吸收峰，故确定检测波长为390nm。
（4）线性关系的考察 分别精密吸取麦冬皂苷D标准品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5mL置具塞试管中，水浴挥干，按最大吸收波长的选择方法显色操作，以随行试剂为空白，于390nm波长处测定吸收值，以麦冬皂苷D的浓度X（μg/mL）对吸光度Y进行线性回归，回归方程y=1.9842x+0.0506，r=0.9994，麦冬皂苷D在0.502～3.514μg/mL范围内线性关系良好。
（5）精密度试验 从同一份浙麦冬样品制备液中量取相同量溶液5份，按照最大吸收波长的选择方法平行测定麦冬总皂苷的含量，结果显示RSD=2.5%，表明精密度良好。
（6）重复性试验 取同一份麦冬样品碎粒，连续称取5次，分别按供试品溶液制备和最大吸收波长的选择下方法操作，测定每份含量，结果RSD=3.8%。
（7）稳定性试验 取同一对照液，按最大吸收波长的选择方法显色操作，每隔2小时测定一次，结果6次测定的吸收值基本不变，RSD=2.17%，表明供试品溶液显色至少在12小时内稳定。
（8）加样回收率试验 精密称取已知麦冬总皂苷含量的样品6份，分别精密加入等量麦冬皂苷D对照品，按样品制备法制备，并按最大吸收波长的选择方法显色操作，390nm处测定吸收值，代入标准曲线方程，计算出平均回收率为99.36%，RSD=2.80%（n=6）。
（9）供试品总皂苷含量测定 精密量取每份样品溶液5.0mL，重复最大吸收波长的选择方法显色操作，在390nm处测定吸收值，代入标准曲线并计算出供试品的总皂苷含量。
浙麦冬总黄酮主要为水溶性黄酮，试验过程中对醇沉条件采用了单因素考察，发现浙麦冬总黄酮得率随着浓缩比的增加而增加，而且浓缩比的增加同时又节约了醇沉的乙醇用量，故选择浓缩比1/10的醇沉条件；浙麦冬总黄酮得率虽然随着醇沉浓度的减小而增加，但所得醇沉液也逐渐浑浊；醇沉次数越多浙麦冬总黄酮越精制但得率越低，但醇沉1次后醇沉液已基本澄清，选择醇沉1次。皂苷为一类极性较大，结构复杂的化合物，无紫外吸收，无专一显色剂，测定时易受糖的干扰，选择不含交换基团的大孔树脂纯化皂苷，洗脱时水洗至无糖，采用斐林试剂反应检识；在选择洗脱浓度时，取1.0mL麦冬总皂苷提取液，上柱，先用蒸馏水洗脱至无糖后，分别用10mL40%～80%浓度的乙醇溶液进行洗脱，收集不同浓度的乙醇洗脱液并定容至25mL容量瓶，取5.0mL测定其吸光度，确定最佳的洗脱剂浓度为70%；用70%乙醇洗脱至无皂苷，采用TCL检测，展开剂为正丁醇-醋酸乙脂-水（4∶1∶5），显色剂为10%硫酸乙醇液。