放射免疫分析技术

二、放射免疫分析技术

(一)原理

该技术是用竞争性结合的原理,应用放射性同位素标记抗原(或抗体),与相应抗体(或抗原)结合,通过检测抗原抗体复合物的放射性判断结果。放射性核素具有高灵敏性和抗原抗体反应的特异性相结合,可进行超微量分析。可用于检测抗原、抗体、抗原抗体复合物。

(二)操作步骤

将抗原(标准品和待检样品)、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中,在一定温度下作用一段时间后,使竞争抑制反应达到平衡。标记的抗原与未标记的抗原和抗体相结合后,均形成抗原抗体复合物。由于标记抗原抗体复合物含量很低不能自行沉淀,需要合适的沉淀剂使其彻底沉淀,完成与游离标记抗原的分离。根据抗原的特性、待检样品体积、测定需要的灵敏度和精确度,进行分离技术的选择,常用的分离法有盐析法、双抗体法、聚乙二醇法、活性炭吸附法等。标记抗原抗体复合物与游离的标记抗原分离后,可进行放射性强度的测定。测定仪器有2 类:液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪。在此试验操作过程中,要注意做好个人防护,放射源、放射性废弃物要进行专门处理,放射物质储存要符合防护的要求。

该技术具有灵敏度高、特异性强,检出极限可达pg 级水平,可广泛应用于生物活性物质、激素、各类抗原和小分子物质检测的优点。但由于该技术在操作过程中存在放射线辐射和污染问题,对实验室条件和人员有较高要求,很大程度上限制了此项技术的应用。