一、病原学诊断

一、病原学诊断

(一)病毒分离鉴定

外周血和新鲜乳汁经离心沉淀、洗涤,悬浮制备白细胞,肺、滑膜、乳房等尸检组织样品制备冲洗液材料。将制备的白细胞或冲洗液与指示细胞混合培养,常用的指示细胞有绵羊脉络丛细胞或巨噬细胞等。观察细胞病变,其特点是出现具有折光性树突状的星状细胞并伴有合胞体。培养物需培养数周,出现细胞病变时,做飞片培养、固定,用间接荧光抗体或间接过氧化物酶方法检测固定的病毒抗原。另外对任何可疑单层细胞可离心沉淀,用透射电镜检查病毒颗粒,细胞培养物上清液中若出现逆转录酶,说明有反转录病毒存在。肺冲洗液材料更容易进行巨噬细胞培养,1~2 周用血清学、电镜或反转录酶试验检查是否存在病毒。

(二)分子生物学诊断

用于梅迪-维斯纳病毒核酸检测的技术有各类PCR。该病毒的LTR 和pol 是基因组中比较保守的序列,各种分子诊断方法多选择这2 个基因片段作为检测靶标,不同毒株间LTR 和pol 片段较gag 更保守,env 基因变异性最高。目前,对PCR 应用的争议是该方法具有高度敏感性,容易扩增出不相关的片段导致假阳性,因此应该对扩增产物进行杂交、限制性内切酶分析或者测序。对PCR 产物进行测序是世界动物卫生组织推荐的方法。