二、血清学诊断

（一）病毒中和试验

将乳鼠脑组织或细胞培养物制成PBS 悬液作为病毒抗原，其含毒量为200 个/mL LD50。待检血清在56℃条件下30 min 灭活后，从1∶5 起进行2 倍递进稀释。每一种稀释度吸取1 mL 在试管内，另取一支试管加入1∶5 稀释的正常血清（60℃条件下30 min 灭活）作为对照。然后各试管中加入等量的上述病毒悬浮液，充分混匀后置于37℃温箱内中和1 h。每一种稀释度脑内接种3～5 只乳鼠。根据乳鼠的死亡和存活数，计算出被检血清的50%中和效价。也可采用“双份血清”进行中和试验，如果血清抗体效价增加4 倍或4 倍以上，即可作出诊断。

（二）补体结合试验

将样品接种于BHK-21 细胞单层，置于37℃条件下培养48～72 h，待细胞病变达90%以上，收毒。细胞毒液经反复冻融3 次，加入2%灭活豚鼠血清，再冻融5 次，以2 000 r/min 离心10 min，取其上清液测定效价合格，即制成细胞毒冻融抗原（V 抗原）。对人工感染牛康复期血清阳性检出率较高，并且具有较高的特异性。