2 操作方法

2 操作方法

2.1 使用标准抗原进行口蹄疫A、O、C、Asia-I 型及与猪水泡病鉴别诊断。

2.1.1 被检样品的稀释:把8 只试管排列于试管架上,自第1 管开始由左至右用稀释液I 作二倍连续稀释(即1∶6、1∶12、1∶24……1∶768),每管容积0.5 mL。

2.1.2 按下述滴加被检样品和对照。

2.1.2.1 在血凝滴定板上的第一至第五排,每排的第八孔滴加第八管稀释被检样品0.05 mL,每排的第七孔滴加第7 管稀释被检样品0.05 mL,以此类推至第一孔。

2.1.2.2 每排的第九孔滴加稀释液I 0.05 mL,作为稀释液对照。

2.1.2.3 每排的第十孔按顺序分别滴加口蹄疫A、O、C、Asia-I 型和猪水泡病标准抗原(1∶30 稀释)各0.05 mL,作为阳性对照。

2.1.3 滴加敏化红细胞诊断液:先将敏化红细胞诊断液摇匀,于滴定板第一至第五排的第一至第十孔分别滴加口蹄疫A、O、C、Asia-I 型和猪水泡病敏化红细胞诊断液,每孔0.025 mL,置微量振荡器上振荡1~2 min,20~35℃放置1.5~2 h 后判定结果。

2.2 使用标准阳性血清进行口蹄疫O 型及与猪水泡病鉴别诊断。

2.2.1 每份被检样品作四排、每孔先各加入25 μL 稀释液II。

2.2.2 每排第一孔各加被检样品25 μL,然后分别由左至右作二倍连续稀释至第七孔(竖板)或第十一孔(横板)。每排最后孔留作稀释液对照。

2.2.3 滴加标准阳性血清:在第一、第三排每孔加入25 μL 稀释液II;第二排每孔加入25 μL 稀释至1∶20 的口蹄疫O 型标准阳性血清;第四排每孔加入25 μL 稀释至1∶100 的猪水泡病标准阳性血清;置微型混合器上振荡1~2 min,加盖置37℃作用30 min。

2.2.4 滴加敏化红细胞诊断液:在第一和第二排每孔加入口蹄疫O 型敏化红细胞诊断液25 μL;第三和第四排每孔加入猪水泡病敏化红细胞诊断液25 μL;置微型混合器上振荡1~2 min,加盖20~35℃放置2 h 后判定结果。