一、病原学诊断

（一）BoHV-1 分离鉴定

多种细胞，包括原代或次代牛肾、肺或睾丸细胞，可用于本病毒的分离鉴定。由牛胎儿的肺、鼻甲或气管等组织制备的细胞株及已建立的传代细胞系，如牛肾传代细胞和牛气管细胞都可用于病毒分离。病毒接种细胞后，逐日观察细胞病变。一般接种3 d 后出现细胞病变。若7 d还不出现细胞病变，需再盲传一次，仍无细胞病变则判定为阴性。出现细胞病变后采用中和试验鉴定病毒，也可利用标记的特异性抗血清或单克隆抗体通过免疫荧光或免疫过氧化物酶试验鉴定。

（二）BoHV-1 抗原检测

鼻、眼或生殖道拭子可直接涂抹盖玻片，或离心后将细胞点在盖玻片上，进行直接或间接荧光抗体试验、免疫组织化学试验鉴定病毒。取临床上有发热、流涎和严重流鼻液的病牛，多取几头病牛样品，将制作的抹片风干并在24 h 内用丙酮固定进行检测。

（三）包涵体检查

BoHV-1 可在牛胚肾、睾丸、肺和皮肤的培养细胞中生长，并形成核内包涵体，故可用感染的单层细胞涂片，用Lendrum 染色法染色，镜检细胞核内包涵体。细胞核染成蓝色，包涵体染成红色，胶原为黄色。也可采集病牛病变部的上皮组织（上呼吸道、眼结膜、角膜等组织）制成切片后染色，镜检。

（四）分子诊断技术

常用的PCR 扩增靶标基因有TK、gB、gC、gD 等，这些基因相对保守。采用该技术可在1～2 d 得出结果，可以检出感染早期感觉神经节中的病毒，主要用于检测人工感染或自然感染精液样品中的DNA。