4 试验方法
4.1 加稀释液
在血凝板上1～6 排的1～9 孔；第7 排的1～4 孔第6～7 孔；第8 排的1～12 孔各加稀释液50 μL。
4.2 稀释待检血清
取1 号待检血清50 μL 加入第一排第一孔，并将塑咀插入孔底，右手拇指轻压弹簧1～2 次混匀（避免产生过多的气泡），从该孔取出50 μL 移入第二孔，混匀后取出50 μL 移入第三孔……直至第九孔混匀后取出50 μL 丢弃。此时第一排第一至第九孔待检血清的稀释度（稀释倍数）依次为1∶2（1）、1∶4（2）、1∶8（3）、1∶16（4）、1∶32（5）、1∶64（6）、1∶128（7）、1∶256（8）、1∶512（9）。
取2 号待检血清加入第二排；取3 号待检血清加入第三排……均按上法稀释，注意：每取一份血清时，必须更换塑咀一个。
4.3 稀释阴性对照血清
在血凝板的第七排第一孔加阴性血清50 μL，对倍稀释至第四孔，混匀后从该孔取出50 μL 丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1∶2（1）、1∶4（2）、1∶8（3）、1∶16（4）。第六至第七孔为稀释液对照。
4.4 稀释阳性对照血清
在血凝板的第八排第一孔加阳性血清50 μL，对倍数稀释至第十二孔，混匀后从该孔取出50 μL 丢弃。此时阳性血清的稀释倍数依次为1∶2～1∶4 096。
4.5 加血凝抗原
被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照血清各孔、稀释液对照孔均各加O 型血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25 μL。
4.6 振荡混匀
将血凝板置于微量振荡器上1～2 min，如无振荡器，用手轻拍混匀亦可，然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀，不出现血球沉淀为合格。盖上玻板，室温下或37℃下静置1.5～2 h 判定结果，也可延至翌日判定。
4.7 判定标准
移去玻板，将血凝板放在白纸上，先观察阴性对照血清1∶16 孔，稀释液对照孔，均应无凝集（血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点），或仅出现“+”凝集（血球大部沉于孔底，边缘稍有少量血球悬浮）。
阳性血清对照1∶2～1∶256 各孔应出现“++”—“+++”凝集为合格（少量血球沉入孔底，大部血球悬浮于孔内）。
在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“++”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。例如1 号待检血清1～5 孔呈现“++”至“+++”凝集，第六至第七孔呈现“++”凝集，第八孔呈现“+”凝集，第九孔无凝集，那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体效价为1∶128。
接种口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1∶128（第七孔）牛群、羊群免疫抗体效价达到1∶256（第八孔）呈现“++”凝集为免疫合格。