一、病原学诊断
2025年10月13日
一、病原学诊断
(一)病原分离鉴定
取流产母畜的绒毛膜绒毛或附近绒膜直接涂片,染色镜检。有多种染色方法可以选用,如改良马基维洛、吉姆萨、改良萋-尼抗酸染色法等。阳性病例涂片后用一种方法染色时,在高倍显微镜下可见在蓝色的细胞碎片背景中有大量红色或成团的小的球菌样原体。暗视野下,原体呈淡绿色。若没有流产胎盘等组织样品,可取流产后24 h 内的母畜阴道拭子、或刚流产的胎儿、或死产羔羊的湿润体毛进行涂片镜检。由于流产嗜性衣原体具有人、畜共患性,实验人员进行鸡胚分离培养时须在相应安全等级的实验室完成,注意做好生物安全防护。接种鸡胚前先将样品用含有链霉素(200 μg/mL)的营养肉汤配制成10%悬浮液,取0.2 mL 悬浮液接种于6~8日龄鸡胚卵黄囊,37℃条件下培养,鸡胚在感染4~13 d 死亡。在死亡鸡胚已形成血管的卵黄膜涂片上可见大量的原体。
(二)分子生物学诊断技术
MOMP 基因是流产嗜性衣原体的种特异性抗原,与同属的其他衣原体存在差异,在种属鉴定上具有应用价值。针对MOMP 基因核苷酸序列设计的PCR 方法,灵敏度达到0.1 pg。对流产嗜性衣原体(S26/3 菌株)进行研究,发现其独有一段呈螺旋状的重复序列,由螺旋酶基因编码,根据特异性的螺旋酶基因设计引物,建立PCR 方法诊断绵羊地方性流产,具有快速、敏感、特异等特点。