一、病毒分离鉴定

病毒分离为国际贸易指定的检测手段，是诊断该病的基本方法之一。对胎牛肾细胞、犊牛肾细胞、犊牛睾丸细胞、牛鼻甲骨和胎牛肺等原代细胞或继代细胞进行病毒分离。国内许多学者用不同的牛细胞，从奶牛、牦牛、绵羊、山羊、猪等动物中分离出病毒并进行鉴定。犊牛睾丸细胞对牛病毒性腹泻病毒/黏膜病病毒最敏感，易出现病变。不同毒株所产生的细胞病变各不相同，典型的细胞病变可见细胞变圆，细胞间距增大，胞质内出现大小不等、边缘整齐的空泡，细胞逐渐脱落，并出现细长或网状的胞质性突起物，核变致密，核位置靠边，最后细胞完全脱离瓶壁，出现空斑。在分离不产生细胞病变的毒株时，可用新城疫病毒激发，使之在细胞培养中产生细胞病变，即所谓的END 强化试验。也可取病料悬浮液分别接种于9～11日龄鸡胚绒毛尿囊膜和7～9日龄鸡胚卵黄囊内，每胚接种0.1～0.2 mL，接种后置37℃条件下培养3～5 d 观察结果。有些毒株可在鸡胚绒毛尿囊膜上生长，并在尿囊膜上形成痘斑；有些毒株可在鸡胚卵黄囊中生长繁殖。病毒分离是检测牛病毒性腹泻/黏膜病最经典的方法，但是此方法比较耗时。