一、病原学诊断

（一）病毒的分离培养

牛白血病病毒是一种外源性反转录病毒，在结构和功能上与人T 淋巴细胞白血病病毒有亲缘关系。感染病样在体外与淋巴细胞及一种指示细胞系共同培养时，经促细胞分裂素刺激，会产生感染性病毒。病毒分离鉴定是诊断牛白血病最基础的方法，但牛白血病病毒分离鉴定费时费力，一般需3～4 d。

（二）电子显微镜检测

将牛白血病病毒感染牛的淋巴细胞在37℃条件下培养48～72 h，制作超薄的切片标本，在电镜下观察，可见在细胞质的空泡内和细胞膜上有游离的及正在出芽病毒的颗粒。

（三）动物试验

通过接种易感动物来判定是否感染牛白血病。一般将病牛的血液或经处理的病料腹腔注射绵羊，可在2～3 周出现血清阳转，在6 周后检测特异性抗体作感染判断。接毒绵羊不出现持久性淋巴细胞增多症，但肿瘤发生率较高且出现较早。

（四）抗原检测

牛白血病病毒的细胞培养物可通过ELISA、琼脂免疫扩散试验等方法检测P24 抗原和gp51 抗原以检测牛白血病病毒。

（五）分子诊断技术

目前，牛白血病病毒的分子诊断技术常用的有PCR、套式PCR 和荧光定量PCR 方法。通常针对病毒基因组gag、pol 和env 区设计引物。世界动物卫生组织推荐的套式PCR 方法是以env 基因、编码gp51 的区域设计的引物为基础，这个基因高度保守，而且基因和抗原通常存在于所有感染动物并贯穿整个感染过程，很多PCR 方法的建立都是针对该段基因。