二、血清学诊断
2025年10月13日
二、血清学诊断
由于感染该病的山羊大多数情况下不表现临床症状,血清中抗体检测是鉴别带毒者的有效方法。血清学诊断最常用的方法是琼脂凝胶免疫扩散试验和酶联免疫吸附试验,这2 种方法也是世界动物卫生组织推荐的方法。
(一)琼脂凝胶免疫扩散试验
该方法是检测血清中山羊关节炎-脑炎病毒抗体的最常用的一种方法。由于山羊关节炎-脑炎病毒与梅迪-维斯纳病毒有较近的亲缘关系,梅迪-维斯纳病毒的p25、gp135 抗原与山羊关节炎-脑炎病毒的p28、gp135 抗原之间有强烈的交叉反应,因此可用梅迪-维斯纳病毒制备的琼脂扩散抗原进行山羊关节炎-脑炎病毒的抗体检测。但用梅迪-维斯纳病毒制备抗原的琼脂凝胶免疫扩散试验敏感性较低,在山羊关节炎脑炎病毒的诊断和控制上有很大的局限性。常用的抗原有全病毒抗原、gp135 和p28 抗原。由于山羊关节炎-脑炎病毒抗原与梅迪-维斯纳病毒抗原成分有较强的交叉抗原性,在琼脂凝胶免疫扩散试验检测中不能区分鉴别山羊关节炎-脑炎病毒和梅迪-维斯纳病毒。
(二)酶联免疫吸附试验
1.以全病毒作为包被抗原
山羊关节炎-脑炎病毒的全病毒培养物中的上清液,经差速离心和表面活性剂处理后即可作为抗原使用。此法准确性高,但费时、成本高。
2.以表达蛋白作为包被抗原
常以gag 和env 基因全部或部分节段进行表达构建,包括重组p55、p28、p16 和gp135 抗原。重组的gag 和env 基因产物与大肠杆菌的GST 融合蛋白融合制备包被抗原,合成肽也常用作ELISA 抗原。p28 最常用于ELISA检测,尽管血清中抗p28 抗体水平要低于抗gp135 的抗体水平,但p28-ELISA 检测的灵敏性和准确性更好。