二、免疫学诊断

牛结核病免疫学诊断的主要目的是监测牛群中牛结核病的感染状态，其次是评估新引进牛的牛结核病感染状态，最后是预测牛群牛结核病的未来发展态势。目前，牛结核菌素纯化蛋白衍生物（PPD）皮内变态反应试验、γ-干扰素（IFN-γ）诊断法、ELISA 等是检测牛结核病的常用方法，另外免疫胶体金、琼脂扩散试验、淋巴细胞增生试验等也可用于牛结核病的检测，但应用较少。

（一）结核菌素试验

结核菌素试验是世界动物卫生组织唯一推荐，并被世界各国广泛使用的牛结核病诊断方法。英国和欧共体诸多国家就是采用该方法消灭或控制牛结核病的。澳大利亚、新西兰、加拿大和美国等国家均以比较变态反应作为牛结核活畜检疫的确认试验。该试验是测定牛结核病的标准方法，即皮内接种牛结核菌素纯化蛋白衍生物（PPD），并于72～96 h 测量接种部位肿胀的程度。由于PPD 皮肤试验个体差异较大，注射剂量和PPD 批号对牛个体反应均有差异，呈现不同的皮肤反应，结果以皮肤厚度增加数为准，易造成人为误差。动物发生某些细菌或病毒感染，或使用某些药物治疗，均可能造成假阳性或假阴性结果。

（二）γ-干扰素诊断法（IFN-γ）

该法是1990年由Wood 等建立的。此方法已在许多国家完成了田间试验，并在澳大利亚、爱尔兰和新西兰被批准为正式试验。IFN-γ 诊断法的原理是致敏的淋巴细胞在体外培养的条件下，接受特异性抗原（如PPD、ESAT-6等）刺激而活化，表达并分泌IFN-γ，再以ELISA 方法对培养上清液中的IFN-γ 进行定量测定。此方法敏感性高，能鉴别出早期感染牛分枝杆菌的病牛，降低了传染的风险。该方法检测成本高，采血8 h 内必须进行检测，对样品要求高。