一、病原学诊断

一、病原学诊断

(一)涂片检查

包括涂片、染色、镜检3 个步骤,染色主要是吉姆萨染色法。采外周血液(一般为耳静脉)制成薄血涂片,甲醇固定后染色镜检,检测红细胞内是否有特征性虫体。牛巴贝斯虫是一种小型虫体,红细胞中的滋养体或裂殖体呈梨形(单个或成双)、环形、椭圆形、圆形、杆状及不规则形状,成双虫体以其尖端相连成钝角,位于红细胞边缘或偏中央。每个虫体内含有一团或两团染色质,位于其一端或两端。双芽巴贝斯虫较大,红细胞中滋养体或裂殖体呈梨形、环形、椭圆形或杆状,其尖端相连成锐角。卵形巴贝斯虫是一种大型虫体,虫体长度大于红细胞半径,呈梨籽形、卵形、卵圆形等,虫体中央往往不着色,形成空泡。

(二)分子生物学诊断

用PCR 扩增巴贝斯虫DNA 技术是检测巴贝斯虫感染较为敏感的方法,尤其是当巴贝斯虫感染表现为亚临床或虫血症较低的时候。用PCR 扩增巴贝斯虫DNA 的16S rRNA 基因,可以检测出虫血症0.008 3%的感染动物。根据吉氏巴贝斯虫核糖体小亚单位RNA 序列设计出一对特异性引物BG-1 和BG-2,可从该虫cDNA 文库中扩增出481 bp 的特异片段。所用引物不与牛巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、环形泰勒虫发生任何扩增反应。