一、寄生虫学诊断
包括全血压滴标本检查、血液涂片染色标本检查、血液厚滴标本染色检查、集虫法、动物接种、体外培养和微型阴离子交换离心技术7 种。
(一)新鲜血片检查
在干净载玻片上滴一小滴鲜血,盖上盖玻片,使血液扩散成为细胞单层,用光学显微镜(100 倍)观察活动锥虫。在载玻片上滴血前加一滴生理盐水或3%柠檬酸钠生理盐水,可防血液干涸。
(二)薄血膜染色检查
将一小滴鲜血滴在干净载玻片的一端,按常规方法推成薄血膜,迅速风干,用甲醇固定,干燥后加吉姆萨染色液染色25 min,弃去染色液,用自来水冲洗后过蒸馏水,干燥后显微镜检查。
(三)毛细管集虫检查
用提前吸入3%肝素的毛细管从牛耳或尾静脉吸取血液,封闭未沾血的另一端。以3 000 g 离心10 min,待红细胞全部沉积于毛细管下半部,于血浆与红细胞分界线下1 mm 处将毛细管折断,将带有少量红细胞的血浆滴于载玻片上,使血液扩散成单层细胞。用300~400 倍显微镜检查活锥虫,之后除去盖玻片,晾干,吉姆萨染色,用800~1500 倍显微镜观察虫体。
(四)微型阴离子交换离心技术
取200 μl 血液经表膜层过DE52-纤维柱,用PSG 洗脱,用巴斯德吸液管收集洗脱液,拉长巴斯德吸液管末端并封闭。将此管插入带有皮下注射针帽的10 mL 离心管,在4℃条件下2 645 g 离心。拉长巴斯德吸液管末端在显微镜(100 倍)下检查,见虫体者为阳性。
(五)动物接种
采取待检动物血0.25 mL,加入灭菌阿氏液0.25 mL,经腹腔注射给小鼠,每周3 次从尾部采血检查活锥虫。为提高锥虫在小鼠体内繁殖的敏感性,可用醋酸氢化可的松抑制小鼠的免疫力。这种方法被认为是迄今最可靠的检测方法之一。
(六)体外培养
用长爪沙土乳鼠和乳兔肾细胞、牛白细胞等敏感细胞作为滋养层,采用密闭培养的方法,对泰氏锥虫进行体外培养,连续培养1 个多月,培养期间可收获虫体6~8 次。