2 器材
2.1 仪器
分析天平、高速离心机、真空干燥器、PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪（或紫外分析仪）、液氮或-70℃冰箱、微波炉、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2 μL 、20 μL、200 μL、1 000 μL）。
2.2 耗材
眼科剪、眼科镊、称量纸、20 mL 一次性注射器、1.5 mL 灭菌离心管、0.2 mL 薄壁PCR 管、琼脂糖、500 mL 量筒、500 mL 锥形瓶、吸头（10 μL、200 μL、1 000 μL）、灭菌双蒸水。
2.3 引物设计
根据GenBank 上已发表的炭疽杆菌POX1 质粒序列，设计并合成了以下两条引物：
ATXU：5’-AGAATGTATCACCAGAGGC-3’ATXD：5’-GTTGTAGATTGG AGC
CGTC-3’，此对引物扩增片段为394 bp。
2.4 样品的采集与处理
2.4.1 样品的采集
病死或扑杀的动物取肝脏或脾；待检的活动物，用注射器取血5～10 mL，2～8℃保存，送实验室检测。
2.4.2 样品的处理
每份样品分别处理。
2.4.2.1 组织样品处理
称取待检病料0.2 g，置研磨器中剪碎并研磨，加入2 mL 消化液继续研磨。取已研磨好的待检病料上清100 μL 加入1.5 mL 灭菌离心管中，再加入500 μL 消化液和10 μL 蛋白酶K 溶液，混匀后，置55℃水浴中4～16 h。
2.4.2.2 待检菌的处理
取培养获得的菌落，重悬于生理盐水中。取其悬液100 μL 加入1.5 mL灭菌离心管中，再加入500 μL 消化液和10 μL 蛋白酶K 溶液，混匀后，置55℃水浴中过夜。
2.4.2.3 全血样品处理
待血凝后取上清放于离心管中，4℃8 000 g 离心5 分钟，取上清100 μL，加入500 L 消化液和10 μL 蛋白酶K 溶液，混匀后，置55℃水浴中过夜。
2.4.2.4 阳性对照处理
取培养的炭疽杆菌，重悬于生理盐水中。取其悬液100 μL，置1.5 mL 灭菌离心管中，加入500 μL 消化液和10 μL 蛋白酶K 溶液，混匀后，置55℃水浴中过夜。
2.4.2.5 阴性对照处理
取灭菌双蒸水100 μL，置1.5 mL 灭菌离心管中，加入500 μL 消化液10 μL 蛋白酶K 溶液，混匀后，置55℃水浴中过夜。
2.5 DNA 模板的提取
2.5.1 取出已处理的样品及阴、阳对照，加入600 μL 酚/氯仿/异戊醇混合液，用力颠倒10 次混匀，12 000 g 离心10 min。
2.5.2 取上清置1.5 mL 灭菌离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，置液氮中3 分钟。取出样品管，室温融化，15 000 rpm 离心15 min。
2.5.3 弃上清，沿管壁缓缓滴入1 mL 70%乙醇，轻轻旋转洗一次后倒掉，将离心管倒扣于吸水纸上1 min，真空抽干15 min（以无乙醇味为准）。
2.5.4 取出样品管，用50 μL 灭菌双蒸水溶解沉淀，作为模板备用。
2.6 PCR 扩增
总体积20 μL，取灭菌双蒸水8 μL，2.5 mmol/L dNTP、8 pmol/μL 扩增引物、15 mmol/L 氯化镁、10×PCR 缓冲液、0.5 单位TaqDNA 聚合酶各2 μL，2 μL模板DNA。混匀，做好标记，加入矿物油20 μL 覆盖（有热盖的自动DNA 热循环仪不用加矿物油）。扩增条件为94℃3 min 后，94℃30 s，58℃30 s，72℃30 s 循环35 次，72℃延伸5 min。
2.7 电泳
将PCR 扩增产物15 μL 混合3 μL 上样缓冲液，点样于1.5%琼脂糖凝胶孔中，以5 V/cm 电压于1×TAE 缓冲液中电泳，紫外凝胶成像仪下观察结果。
2.8 结果判定
在阳性对照出现394 bp 扩增带、阴性对照无带出现（引物带除外）时，试验结果成立。被检样品出现394 bp 扩增带为炭疽杆菌阳性，否则为阴性。