五、血清学诊断

是布鲁氏菌病诊断（检疫、监测）的主要手段，尤其对群体筛查有意义。在未免疫的情况下，血清学诊断主要检测是否感染布鲁氏菌病，而且可根据抗体滴度的不同判断其病程的长短。但是在免疫的情况下，无法区别免疫抗体和感染抗体。

血清学诊断的方法很多，且多为国际贸易和国家标准方法，主要包括缓冲布鲁氏菌抗原试验、试管凝集试验、补体结合试验、酶联免疫吸附试验和全乳环状试验。血清学检测方法以抗原抗体反应为基础，抗原和参考血清的制备是此方法的关键。诊断抗原多使用牛种布鲁氏菌菌株（光滑型菌落）的纯培养物，绵羊种布鲁氏菌菌株用粗糙型菌落。

（一）缓冲布鲁氏杆菌抗原凝集试验（BBAT）

包括虎红平板凝集试验（RBT）和缓冲平板凝集试验（BPAT）。这些方法的优点是高敏感性，试剂廉价，操作简便，适合于现场操作，并且可用于大面积检疫及流行病学调查，主要用于本病的初筛。缺点是不能鉴别疫苗免疫和野毒感染的动物，容易形成假阳性结果。尽管如此，BPAT 通常是现场检测的唯一方法。在国际贸易中，BBAT 试验是诊断牛、羊、猪种布鲁氏杆菌病的指定筛选试验。

（二）试管凝集试验

检测血清中的布鲁氏菌IgG、IgM、IgA 3 类免疫球蛋白，主要是IgM 和IgG2 型抗体，且检测IgM 的敏感性显著高于IgG，可用于布鲁氏菌病的早期诊断。此种检测方法的优点是可以定量检测，由于检测的IgM 抗体的敏感性高，可作为本病的早期诊断。本方法的缺点是反应时间长，判定结果存在一定的主观性，当感染动物的抗体滴度达不到检测水平时，可能出现误判和漏判。

（三）补体结合试验（CFT）

检测的抗体属IgG 型，出现较晚，且保持时间长，对诊断慢性布鲁氏菌病意义重大。此方法特异性好，敏感性差，是个体诊断的金标准，官方普遍采用此方法作为本病的确诊试验。但补体结合试验不适用于猪的个体诊断，因为猪的补体会干扰豚鼠补体而使补体结合试验的敏感性降低，但是在猪群体的监测中，CFT 方法仍然有应用价值。本方法需大量试剂及各对照组，试验步骤繁杂，结果判定具有主观性，对实验室要求高。本方法是国际贸易中指定的用于牛、羊布鲁氏杆菌病的确诊方法，在很多国家布鲁氏杆菌病的控制和消除项目中作为确诊试验。

（四）酶联免疫吸附试验（ELISA）

具有敏感、特异、简单、快速、稳定、安全及污染少、易于自动化操作等特点，主要检测IgG 抗体，是一种与补体结合试验效果相当的检测方法，操作方便，既可作为确诊检测，又可筛选和鉴别，适合大规模检测。本检测技术的关键在于抗原的选择，在标准化的ELISA 诊断试剂中，主要使用S-LPS 抗原，检测最低抗原浓度达0.05～0.1 mg/mL。

（五）全乳环状试验

用已知全乳四氯唑染色环状抗原检测新鲜的全脂乳中的未知抗体，在乳样与稀释抗原液面处出现乳白色沉淀环，按照乳脂和乳柱的颜色进行判定，可进行定性或半定量试验，此方法操作简便、灵敏度高，但对乳样要求苛刻，存在非特异性反应，可用于本病的初筛。