（一）实验原理

1.传代的原因 细胞通常遵循一种标准的生长方式（图5-4），传代接种后的细胞经过一段潜伏期进入指数生长期，这一期被称作对数期。当细胞长满整个培养皿的培养面积时，或者当细胞数量超出培养基的培养能力时，细胞生长速度减慢或者停止，这时就需要进行传代了。

2.传代的标准

（1）细胞密度：正常细胞长到彼此汇合时，就需要传代了；如果继续培养细胞将脱离细胞周期，再接种培养就需要比较长的时间才能恢复过来，进入正常的细胞周期。

（2）培养基耗尽：一般而言，p H 的降低（从红色变为黄色）伴随着细胞密度的增加，这是需要传代的主要指标。(https://www.daowen.com)

（3）维持正常的细胞传代周期：常规传代最好按照严格的时间表进行，这样可保持细胞生长和增殖周期稳定，确保实验操作过程中细胞状态的一致性和实验结果的可重复性。如果到了适合的时间细胞还没有达到足够高的密度（即细胞没有彼此汇合），那么在传代时应当增加接种密度。相反，若细胞很快汇合，那么传代时就要降低接种密度。常规情况下，一个月进行7～8次传代即可，两次传代之间的间隔都是3天。一旦这一常规程序建立起来，对于一定的细胞接种密度，培养时间和细胞产量在每次周期性生长过程中都是一致的，反复随意偏离细胞传代周期会使细胞偏离正常生长条件或表明细胞已衰退。

图5-4　培养细胞的生长过程