骨组织的荧光标记与组织形态计量学

1.荧光标记法 骨形成过程也是骨基质矿沉积的过程，以标记的荧光化合物与钙络合，可帮助观察骨基质的形成与骨矿化过程。荧光标记物与钙结合后沉积在矿化前沿，可动态观察骨组织的变化。常用的荧光标记物有钙黄绿素（calcein）、四环素（tetracyclin）和茜素红。通常为双标记法，以钙黄绿素、茜素红双标记法为例：在动物安乐死之前第8天皮下注射钙黄绿素作为第一次荧光标记，安乐死之前1天皮下注射茜素红作为第二次荧光标记，两次荧光标记间隔时间一般为1周（如果以钙黄绿素和四环素双标记则间隔时间为10天），即可在骨表面形成红色和绿色的双荧光标志。可根据荧光标记周长百分率和两次荧光标记之间的距离，判断实验动物在这段时间骨形成的情况和速率。

2.组织形态计量学 在光学显微镜和荧光显微镜下采用数字化图片分析仪对不脱钙的骨组织进行测量，能够得到骨形态计量学参数包括静态参数和动态参数。静态参数描述骨量多少和骨质量，动态参数是描述骨形成和骨吸收的动态指标。常用骨组织形态计量学参数如下。

（1）骨小梁宽度（Tb.Wi，三维结构中用Tb.Th表示）：测量吸收陷窝附近同一骨小梁的宽度，用于描述骨小梁结构形态。

（2）骨小梁数量（Tb.N）：测量一定宽度下的骨小梁数量，用于描述骨小梁结构形态。

（3）骨小梁数量表面积（TBS）：所测范围内的骨小梁表面积。(https://www.daowen.com)

（4）骨小梁面积百分数（%Tb.Ar）：所测骨小梁面积占骨组织面积的百分率，反映骨量的多少。

（5）矿化沉积率（MAR）：两条荧光标记带之间的平均距离除以两次荧光注射间隔的天数，反映骨矿化的快慢，代表成骨细胞的活性。

（6）骨形成率（BFR）：表示单位面积骨小梁表面每天新生成矿化骨的多少。

（7）破骨细胞数量（Oc.N）：表示单位骨小梁内含有的破骨细胞数量，也可以用每平方毫米组织切片面积内含有的破骨细胞数量来表示，反映骨吸收情况。