石蜡制片技术
常规的石蜡制片程序如图10-1所示，包括取材、固定、脱水、包埋、切片、染色、封固7个基本步骤。组织脱水、透明和浸蜡时间表（脱水机）如表10-1所示。
图10-1 石蜡制片程序
表10-1 半封闭式自动组织脱水机程序
（续表）
1.脱水与透明 脱水过程常从70%乙醇开始，80%、95%至无水乙醇逐级更换，最后完全把组织中水分置换出来。透明是指用透明剂将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋。脱水、透明与浸蜡步骤是在自动脱水机中完成。
2.浸蜡与包埋 浸蜡的目的在于除去组织中的二甲苯而代以石蜡。石蜡更换一般2～3次，总浸蜡时间为2～3 h。包埋是把浸蜡的组织入包埋框中，进行石蜡包埋以利进一步处理。
3.修片与切片 切片厚度为5～7μm。切片时先将组织蜡块卡入样品夹上，打开切片机手轮，左手轻轻转动小轮，右手转动大轮，蜡块先行粗削，直到组织最大切面露出为止。待组织修全后，左手执毛笔，右手转动大轮，匀速转动，用毛笔轻轻带起蜡带，放入预先准备的自来水中或30%乙醇中，然后选择蜡片并粘贴于载玻片上。
4.捞片与展片 捞片机的温度一般设置在45℃左右（用石蜡熔点温度减去15℃，即最佳温度设置），要保持水面干净，组织面要放在载玻片下2／3的交接界处，把蜡片直接置于水中展片，待蜡片完全展平后（勿使蜡片溶解），倾斜载玻片除去多余水分。(https://www.daowen.com)
5.石蜡切片苏木精-伊红（HE）染色法
（1）脱蜡至水：从温箱中取出烘干的切片，立即投入二甲苯脱蜡，然后入梯度乙醇中（100%、95%、90%、85%）逐步复水。
（2）苏木精染色：将切片置于苏木精染色液中，染色时间根据说明书推荐进行，自来水洗去残留染色剂，0.5%～1%盐酸乙醇分化（数秒，根据实际情况严格控制时间），1%氨水蓝化，切片从淡紫色转变为鲜艳的蓝色即可，自来水洗1 min。
（3）伊红染色及脱水、透明：伊红染液1～3 min，85%乙醇20 s，95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 min，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各1～2 min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明各3～5 min（图10-2）。
图10-2 肾脏HE染色图例（200×）
（苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红染液为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色）
（4）封片：从二甲苯中取出载玻片，稍干，切片上滴加1～2滴中性树胶（封片剂），盖玻片封片。HE染色人工操作步骤具体见表10-2。
表10-2 HE染色步骤（人工操作）
（续表）
