蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至固相支持体
经电泳分离后的蛋白质往往需再利用电泳方法将蛋白质转移到固相载体上，这个过程称电泳印迹，常用以下两种电转移方法。
1.半干法 凝胶和固相载体被夹在用缓冲溶液浸湿的滤纸之间，通电时间为10～30 min。
2.湿法 凝胶和固相载体夹心浸放在转移缓冲溶液中，转移时间可从45 min延长到过夜进行。
由于湿法的使用弹性更大，在这里只描述湿法操作过程。目前进行的蛋白质免疫印迹大多是从凝胶上直接把蛋白质电转移至硝酸纤维素滤膜（NC）或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜之上。把凝胶的一面与膜相接触，然后将凝胶及与之相贴的滤膜夹于滤纸和两块塑料板之间。把整个结合体浸泡于配备有标准铂电极并装有p H 8.3的Tris-甘氨酸缓冲液的电泳槽中，使膜靠近阳极一侧，然后接通电流。蛋白质从凝胶中向阳极迁移而结合到膜上。为了防止过热并因而导致在夹层中形成气泡，转移过程应在冰浴条件下进行（图9-6、图9-7）。
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图9-6 电转移示意图
图9-7 湿法电泳印迹装置
硝酸纤维素膜（NC膜）：在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与NC膜发生疏水作用而高亲和力地结合在一起。在去污剂作用下，结合的蛋白质可被洗脱下来。有0.45μm 和0.2μm 两种规格，＞20 k D的蛋白质可用0.45μm 的膜，＜20 kD的蛋白质用0.2μm 的膜。NC膜结合蛋白质的能力主要与膜的硝酸纤维素纯度有关。如采用100%纯度的硝酸纤维素，则可保证最大的蛋白质结合量并减少非特异性结合，降低杂交背景。硝酸纤维素膜比较脆，漂洗一两次就会破损，不能反复使用。
聚偏二氟乙烯（PVDF）膜：PVDF是一种高强度、耐腐蚀的物质。PVDF膜可结合蛋白质，且可分离小片段的蛋白质，与NC膜一样，可进行各种染色和化学发光检测。PDVF膜结合蛋白质的效率低于NC膜，但由于稳定、耐腐蚀，灵敏度、分辨率和蛋白质亲和力较高，非常适合于低分子量蛋白质的检测。PVDF膜在使用之前需用无水甲醇进行浸泡饱和1～5 s，以活化PVDF膜上的正电基团，使它更易与带负电的蛋白质结合。目前已开发出无须用甲醇浸泡的PVDF膜。