胶原纤维染色

胶原纤维是固有结缔组织中含量最多的一种，广泛分布于机体各部，其中皮肤（真皮）、肌腱、巩膜、硬膜等处含量丰富。胶原纤维主要由纤维母细胞合成，化学成分为胶原蛋白，通常情况下不溶于水，在酸性溶液中膨胀。HE染色不能以不同颜色将胶原纤维的形态结构特点显示出来。

1.Van Gieson苦味酸性复红法

固定：4%中性甲醛液。

试剂配制：①Van Gieson液。甲液（1%酸性品红水溶液），乙液（1.22%苦味酸饱和水溶液）。临用时取甲液1份、乙液9份混合后使用。②Weigert铁苏木素溶液。甲液（苏木素1 g+95%或无水乙醇100 ml），乙液（29%三氯化铁水溶液4 ml+纯水95 ml+盐酸1 ml）。临用时取甲液和乙液等量混合。

操作步骤：①组织切片脱蜡至水。②用Weigert铁苏木素液染5～10 min；自来水冲洗数分钟。③0.5%盐酸乙醇分化数秒。④自来水洗至变蓝，用纯水洗。⑤用Van Gieson液染1～5 min；倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。⑥无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

结果：胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色，胞核呈蓝褐色。(https://www.daowen.com)

2.Masson三色改良法

固定：Bouin液或Zenker液固定效果较佳。若用单纯甲醛固定，切片应在3%升汞或苦味酸乙醇液中放置1 h，则有加强染色的作用，但会使上皮细胞产生非特异性荧光。

试剂配制：①地衣红染液。地衣红1 g，80%乙醇99 ml，盐酸1 ml。②Harris苏木素液。苏木素2.5 g，无水乙醇25 ml，钾明矾50 g，纯水500 ml，氧化汞1.25 g，冰醋酸20 ml。将苏木素溶于无水乙醇中，将预先已经溶解明矾的水溶液加入到苏木素乙醇液，煮沸停止加热，慢慢加入氧化汞，再煮沸2 min，溶液冷却后加入醋酸。③丽春红品红液。丽春红0.8 g，酸性品红0.4 g，冰醋酸1 ml，纯水99 ml。④亮绿染液。亮绿2 g，冰醋酸2 ml，纯水100 ml（亮绿可用苯胺蓝代替）。⑤冰醋酸水溶液。冰醋酸0.2 ml，纯水100 ml。⑥磷钼酸水溶液。磷钼酸1 g，纯水100 ml。

操作步骤：①石蜡切片常规脱蜡至水。②入地衣红染液30～60 min，纯水洗2～3 min。③入Harris苏木素液3～5 min。④0.5%盐酸乙醇分化，纯水洗。⑤丽春红品红液5～10 min。⑥入冰醋酸水溶液0.5～1 min，纯水洗。⑦1%磷钼酸分化直到各种成分被染清晰（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜红色）。⑧冰醋酸水溶液洗30 s。⑨2%亮绿液2～5 min（或用2%苯胺蓝水溶液替代）。⑩入冰醋酸水溶液30 s，95%及无水乙醇脱水；二甲苯透明、中性树胶封片。

结果：胶原纤维呈绿色（或蓝色），肌肉、纤维素呈红色，红细胞呈橘黄色，胞核呈蓝褐色。