转染操作步骤（图5-14）

（三）转染操作步骤（图5-14）

（1）6孔培养板中接种20万细胞，2 ml完全培养基培养。

（2）18～24 h后，细胞生长到60%～70%的密度时进行转染。

（3）制备siRNA和脂质体的转染混合物。

1）拿出4支1.5 ml离心管，其中两支标记为Control siRNA，另2支标记为Gene siRNA，分别加入150μl无血清、无抗生素的基本培养基。

2）在1支Control siRNA管和1支Gene siRNA管中，分别加入10μl Lipo2000脂质体，轻轻吹打混匀。(https://www.daowen.com)

3）在另1支Control siRNA管和另1支Gene siRNA管中，分别加入5μl的10μM Control siRNA和5μl的10μM Gene siRNA，轻轻吹打混匀。应按照Santa Cruz Biotechnology的转染说明书，6孔培养板每个孔的转染总量是20～80 pmol siRNA，本操作实例中的转染总量是50 pmol，就是从10μM 的siRNA母液中吸取5μl即为50 pmol的siRNA。

图5-14　细胞转染操作

4）4支EP管室温静置平衡3～5 min。

5）分别将静置平衡好的脂质体和siRNA 混合到一起，吹打混匀后，室温静置反应5～10 min。

（4）10 min后，将siRNA和脂质体混合物一滴一滴均匀加入到6孔板的孔中，6孔板每孔300μl。

（5）轻轻混匀后，放入培养箱正常培养，24～48 h后收样进行RNA 表达或蛋白质表达或细胞凋亡等项目检测。