质粒的转化、扩增、抽提与鉴定

T4 DNA连接酶、拓扑异构酶、同源重组酶等方法介导的质粒和PCR产物的连接反应完成后，就需要将连接反应液转化进受体大肠埃希菌细胞中，再将大肠埃希菌涂布在含有抗生素的LB固体培养板上，这样就可以利用抗生素筛选得到包含有重组质粒的单克隆菌落。挑取包含重组质粒的单克隆菌落放到含有抗生素的LB液体培养基进行大量扩增，大量扩增后的单克隆菌液经过细胞裂解、质粒抽提及鉴定步骤后，就得到了实验需要的目的质粒（图12-6）。这些目的质粒可以通过脂质体介导的真核细胞转染实验、病毒介导的细胞感染实验来研究特定基因或调控序列（如启动子、增强子、5′UTR、3′UTR、内含子等）的敲除、敲入、敲低、激活、序列突变等对细胞的功能影响。

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图12-6　质粒的转化、扩增、抽提与鉴定