受体细胞:大肠埃希菌感受态细胞

(三)受体细胞:大肠埃希菌感受态细胞

将质粒转化到受体细菌细胞中,质粒才能进行复制扩增。将复制扩增后的细菌细胞裂解后,就可得到大量的质粒复制子。最常用大肠埃希菌K-12菌株,包括DH1、DH5、DH5α、TOP10等菌株。实验室中使用的大肠埃希菌细胞是经过化学处理的细胞,这种细菌细胞在与质粒孵育后,较易使质粒进入细胞中,并利用细胞内的大分子机器进行复制扩增,这种细胞被形象地称为感受态细胞(competent cells)。(https://www.daowen.com)

将质粒转化进大肠埃希菌感受态细胞的方法最常用的是化学转化法和电穿孔转化法。化学转化法是将质粒与感受态细胞在Ca2+溶液中孵育,通过在细菌细胞膜上制造孔隙、遮蔽DNA分子上的负电荷、促进DNA与细胞膜的结合及结合复合体的内吞过程而实现转化。电穿孔法则是将细胞和质粒放置在电场中,通过高强度的电场作用使细胞膜表面形成瞬时孔洞,外源质粒通过孔洞进入细胞中实现转化。