透射电镜技术
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把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，可形成明暗不同的影像，影像将在放大、聚焦后在成像器件（如荧光屏、胶片、以及感光耦合组件）上显示出来，形成可供肉眼观察的电子显微图像。
1.样品制备 在透射电镜技术中，样品制备是至关重要的环节之一，目前最常用的样品制备方法有负染色技术和超薄切片技术。由于超薄切片技术中的脱水、包埋等过程可能破坏外泌体的完整性，因此负染色技术得到更为广泛的推崇和应用。
（1）负染色技术：又称阴性染色术，是指通过重金属盐在样品四周堆积加强样品外周的电子密度，结果在图像中背景是黑暗的，样品呈“透明”光亮区，从而衬托出样品的形态和大小。
1）主要材料和设备：磷钨酸钠，1%戊二醛溶液，1×PBS，二级纯水，含碳支持膜的铜网。
2）操作流程：①用50μl 1×PBS重悬提取的外泌体沉淀物；②取5μl重悬液加在含碳支持膜的铜网上，在干燥的环境中充分吸附20 min；③滴加磷钨酸钠负染色剂；④用干净的镊子夹住网格置于1×PBS下清洗；⑤将网格转移至50μl的戊二醛溶液中放置5 min；⑥将网格转移至100μl的二级纯水中静置2 min，重复7次。
3）优缺点：操作简单，用时少，比较容易确认外泌体的存在。该法在非自然状态下成像，不能观察到外泌体的脂质双分子层，图像多变。
（2）超薄切片技术：应用超薄切片机制备可供透射电镜观察所用超薄切片的技术，包括取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
1）主要材料和设备：2.5%戊二醛溶液，1%锇酸溶液，乙醇，丙酮，环氧树脂，0.1%柠檬酸铅，1×PBS；超薄切片机。
2）操作流程：①取材；②2.5%戊二醛溶液固定2 h；③1×PBS漂洗，1%锇酸溶液固定1 h；④1×PBS漂洗，乙醇脱水，丙酮脱水；⑤环氧树脂浸透，包埋聚合；⑥修块，超薄切片机切成厚度为10～100 nm 的薄片；⑦使用0.1%柠檬酸铅进行染色。
图17-4 外泌体电镜图
3）优缺点：具有高对比度，可见外泌体的脂质双分子层。但操作复杂，耗时；无法测量外泌体直径。
2.注意事项
（1）需根据实际情况选择合适的放大倍数。
（2）样品制备是决定电镜图像质量好坏的关键步骤。
（3）形态观察具有主观性，对实验人员形态识别能力的要求较高。
3.透射电镜在外泌体鉴定中的应用 利用透射电镜进行外泌体形态观察，结果显示囊泡直径为30～100 nm，呈盘状（图17-4）。