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医学科研型研究生常用实验技术与方法

作者：.戴薇薇，郑培永主编

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第一部分　实验室通识
第一章　现代生物医学基础研究的模式和方法
一、现代生物医学研究的模式
二、生物医学基础研究的三种实验系统
三、围绕“分子生物学中心法则”展开的实验方法体系
第二章　实验室生物安全
一、实验室生物安全概念
二、实验室安全制度管理
（一）实验室工作环境安全要求
（二）实验人员安全操作要求
（三）危险化学物品管理
三、实验室化学废弃物的处理
（一）化学废液的处理
（二）气体废弃物（废气）的处理
（三）固体废弃物（废渣）的处理
（四）生物废弃物的处理
四、实验室意外事故应急预案
（一）紧急救助
（二）微生物实验室应急程序
（三）化学品溢出清除程序
参考文献
第三章　科研实验记录书写要求与规范
一、实验记录的意义
二、实验记录的原则
（一）实验数据的真实性
（二）实验记录的完整性
（三）实验记录的可利用和可重复性
三、实验记录书写规范要求
参考文献
第四章　实验室用水，溶液与缓冲液
一、实验室用水
（一）评价水质的常用指标
（二）实验室常见水的种类
（三）实验室纯水级别分类
二、溶液
（一）溶液的概念
（二）物质的溶解性
（三）溶液的酸碱度
三、溶液的浓度
（一）质量分数
（二）体积百分浓度
（三）质量浓度
（四）摩尔浓度（molarity）
四、缓冲溶液
（一）电解质
（二）电离常数
（三）同离子效应和缓冲溶液
五、常用缓冲溶液的配制
（一）实验室常用缓冲溶液配制
（二）PBS与TBS
六、中药复方和中药单体浓度的计算
（一）中药复方浓度的计算
（二）中药单体浓度的计算
参考文献
第二部分　常用实验技术
第五章　细胞培养常用实验技术
一、原代细胞分离与培养
（一）实验原理
（二）实验材料
（三）溶液配制
（四）分离与培养步骤
二、细胞传代
（一）实验原理
（二）实验材料
（三）溶液配制
（四）实验操作步骤
三、细胞冻存及复苏
（一）实验原理
（二）实验材料
（三）溶液配制
（四）溶液配制
四、细胞计数
（一）实验原理
（二）实验材料
（三）溶液配制
（四）实验步骤（图5-11）
五、细胞活力检测
（一）实验原理
（二）实验材料
（三）溶液配制
（四）实验步骤
六、细胞转染
（一）实验原理
（二）实验材料
（三）转染操作步骤（图5-14）
七、常用细胞培养基比较
参考文献
第六章　常用实验动物基本知识与操作
一、实验动物概念
（一）实验动物
（二）实验动物专业组织与机构
二、实验动物分类
（一）实验动物遗传学分类
（二）实验动物微生物学分类
三、常规实验动物设施分类和使用
（一）设施的类型
（二）设施的组成及布局
（三）屏障设施的使用
四、常用实验动物生物学特征
（一）小鼠
（二）大鼠
（三）豚鼠
五、实验动物福利
（一）动物福利与实验动物福利
（二）实验动物的“3H”宗旨
（三）我国实验动物福利现况
六、实验动物基本操作
（一）常用实验动物的捉取和保定
（二）动物性别的初步鉴别
（三）常用个体标识
（四）安死术
（五）常用实验动物的给药剂量与给药量
（六）小鼠、大鼠的常用给药操作
七、常用实验动物麻醉操作
（一）常用实验动物麻醉药物
（二）麻醉方法及监测
（三）麻醉前的动物准备
（四）麻醉复苏
八、实验动物血液标本采集
（一）实验动物采血基础知识
（二）采血前准备
（三）采血动物的护理
（四）常用实验动物的采血操作
（五）动物血液标本处理程序
九、实验动物其他标本采集
（一）尿液采集
（二）尿液标本的保存与防腐
（三）精液采集
（四）阴道液采集
十、实验动物的尸体剖检和脏器采出
（一）尸体外部检查
（二）各种脏器的采出
参考文献
第七章　蛋白质含量测定和酶联免疫吸附试验
一、蛋白质含量测定
（一）凯氏定氮法
（二）紫外光吸收法
（三）比色法
二、免疫标记技术与酶联免疫吸附试验
（一）免疫标记技术
（二）酶联免疫吸附试验
参考文献
第八章　PCR的原理及应用
一、PCR 技术
（一）PCR技术的基本原理
（二）PCR反应体系与反应条件
（三）PCR扩增产物的检测与分析
（四）PCR反应模板的制备
二、实时荧光定量PCR 的原理及应用
（一）概念及原理
（二）实时定量PCR中的荧光化学物质
（三）实时定量PCR定量方法
（四）实时定量PCR实验方法
（五）实时定量PCR主要应用
三、m iRNA 的PCR 检测
（一）miRNA的概念与特征
（二）miRNA的提取和PCR检测
参考文献
第九章　蛋白质免疫印迹技术原理与操作
一、蛋白质免疫印迹技术原理
（一）蛋白质样品的制备
（二）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
（三）蛋白质从SDS聚丙烯酰胺凝胶转移至固相支持体
（四）对固定于膜上的蛋白质进行染色或者参照蛋白质分子量标准进行定位
（五）封闭杂交膜的非特异性结合位点
（六）抗体和靶蛋白的结合
（七）显色显影与凝胶图像分析
二、蛋白质免疫印迹具体操作步骤
（一）样品准备
（二）电泳
（三）一抗孵育
（四）二抗孵育与显色
（五）所需试剂（供参考）
三、内参抗体的选择
（一）管家基因
（二）蛋白质免疫印迹内参蛋白选择原则
四、蛋白质免疫印迹实验中的注意事项与常见问题分析
（一）蛋白质免疫印迹实验注意事项
（二）常见问题分析
参考文献
第十章　免疫细胞与组织化学技术
一、样本组织制备
（一）取材
（二）固定
二、组织脱钙
（一）组织脱钙方法
（二）确定脱钙“终点”三种方法
三、组织切片制作与染色技术
（一）石蜡制片技术
（二）冷冻切片技术
四、特殊染色技术
（一）胶原纤维染色
（二）网状纤维染色法
（三）弹力纤维染色法
（四）脂类染色法
（五）神经组织染色
（六）肌肉组织染色法
五、免疫组织化学技术
（一）免疫荧光细胞化学技术
（二）免疫酶细胞化学技术
（三）亲和免疫细胞化学技术
六、免疫组织化学染色中常见的问题及对策
（一）组织处理方面
（二）染色方面
（三）抗原修复
（四）对照实验
（五）免疫组化结果的判断
参考文献
第十一章　流式细胞术原理、操作与实验中的应用
一、流式细胞术概述
（一）流式细胞术的基本概念
（二）流式细胞仪
二、流式细胞术的原理
（一）液流系统
（二）光路系统
（三）检测分析系统
三、流式细胞术的基本操作
（一）样品制备
（二）荧光素偶联抗体及其标记方法
（三）对照的设置
（四）光电倍增管电压的设定
（五）荧光补偿调节
四、流式细胞术的应用
（一）流式检测细胞周期
（二）流式检测细胞凋亡
（三）淋巴细胞亚群分析
参考文献
第十二章　分子克隆原理与技术操作
一、分子克隆的基本工具
（一）质粒的类型和元件构成
（二）工具酶
（三）受体细胞：大肠埃希菌感受态细胞
（四）抗生素：筛选重组质粒
（五）琼脂糖凝胶电泳
二、目标DNA 序列的PCR 法克隆和酶切法亚克隆
（一）实验材料
（二）目标DNA序列的PCR法克隆
（三）目标DNA序列的酶切法亚克隆
三、质粒和PCR 产物的酶切及琼脂糖凝胶电泳
（一）实验材料
（二）质粒和PCR产物的酶切实验
（三）质粒和PCR产物的琼脂糖凝胶电泳
四、质粒酶切或PCR 产物酶切后的纯化和割胶回收
（一）实验材料
（二）质粒和PCR酶切产物的纯化实验
（三）质粒酶切产物或PCR产物的割胶回收操作
五、T4 DNA 连接酶介导的质粒和PCR 产物的连接反应
（一）实验材料
（二）连接反应
六、质粒的转化、扩增、抽提与鉴定
（一）实验材料
（二）质粒转化与平板筛选
（三）质粒摇菌扩增
（四）质粒抽提
（五）质粒的鉴定
参考文献
第十三章　基因修饰小鼠技术原理
一、基因编辑概述
（一）基因功能研究
（二）动物基因编辑技术
二、C re/Lox P 系统
（一）Cre／LoxP系统的构成
（二）Cre／LoxP技术的原理与步骤
三、TALEN 系统
（一）TALEN系统结构
（二）TALEN的识别
（三）TALEN的切割和修复
四、CR ISPR/Cas9 基因编辑系统
（一）CRISPR／Cas9系统简介
（二）CRISPR／Cas9的识别和切割DNA的机制
参考文献
第十四章　中药有效成分提取分离及干燥技术
一、中药成分的提取方法
（一）溶剂提取法
（二）水蒸气蒸馏法
（三）超临界流体提取法
（四）其他方法
二、中药有效成分的分离方法
（一）酸碱法
（二）萃取法
（三）沉淀法
（四）盐析法
（五）透析法
（六）色谱法
三、中药复方有效成分的提取分离
（一）中药复方整方提取常用的模式
（二）中药复方有效成分分离的基本模式
四、中药提取液的浓缩方法
（一）常压蒸发
（二）减压蒸发
（三）薄膜蒸发
（四）冷冻浓缩法
五、中药提取液干燥方法及冷冻干燥技术
（一）中药提取液干燥方法
（二）冷冻干燥技术
参考文献
第三部分　专题研究方法
第十五章　细胞凋亡检测常用方法
一、细胞凋亡的概念
二、常用的检测方法
（一）形态学检测
（二）流式方法检测
（三）凋亡相关基因的蛋白质免疫印迹、RT PCR及分光光度法检测
（四）DNA片段检测
（五）TUNEL检测
（六）线粒体膜电位检测细胞凋亡
参考文献
第十六章　细胞自噬检测方法
一、细胞自噬概述
（一）自噬的分类
（二）自噬发生过程与意义
二、自噬的检测方法
（一）电镜下观察自噬性结构——自噬检测的金标准
（二）基于自噬体标记蛋白LC3的检测方法
（三）检测“自噬流”分析自噬性降解过程
（四）自噬的实验性调控
（五）动物体内实验自噬分析
三、细胞自噬检测方法小结
参考文献
第十七章　外泌体研究方法
一、外泌体概述
（一）外泌体的定义与组成
（二）外泌体的功能
二、外泌体的常用提取方法
（一）超速离心法
（二）密度梯度离心法
（三）PEG沉淀法
（四）超滤法
（五）免疫磁珠法
（六）排阻色谱法
三、外泌体的鉴定
（一）透射电镜技术
（二）免疫印迹技术
（三）纳米颗粒跟踪分析技术
四、外泌体的研究策略
（一）差异筛选与数据分析
（二）功能研究
参考文献
第十八章　骨代谢生物学研究方法
一、骨代谢概述
二、骨组织细胞学和分子生物学
（一）成骨细胞及其起源
（二）成骨细胞分化的调控因素
（三）破骨细胞及其起源
（四）破骨细胞分化的调控因素
三、骨代谢细胞生物学研究方法
（一）成骨细胞生物学研究方法
（二）破骨细胞生物学研究方法
四、骨代谢组织生物学研究方法
（一）Micro-CT实验技术
（二）骨代谢生化标志物
（三）骨组织的荧光标记与组织形态计量学
参考文献
第十九章　高效液相色谱在中药研究中的应用
一、高效液相色谱简介
（一）高效液相色谱（HPLC）发展简况及应用
（二）高效液相色谱分离原理
（三）高效液相色谱相关术语
二、高效液相色谱仪介绍及使用方法
（一）高效液相色谱仪的构造
（二）高效液相色谱仪的使用方法
三、高效液相色谱法测定中药成分方法的建立
（一）材料准备
（二）样品及对照品溶液的准备
（三）色谱条件的优化和确定
（四）供试品溶液制备方法的优化和确定
（五）方法学验证
（六）样品检测
参考文献
第二十章　中药网络药理学及常用数据库简介
一、中药网络药理学及其研究思路
（一）中药网络药理学的概念
（二）中药复方网络药理学的研究思路和流程
二、中药网络药理学常用数据库简介
（一）常用中药数据库简介
（二）常用疾病相关基因数据库
（三）常用功能和通路富集分析在线数据库
参考文献
第二十一章　蛋白质组学、代谢组学技术研究方法
一、蛋白质组学及其应用
（一）蛋白质组学基本概念
（二）蛋白质组学的研究方法
（三）蛋白质组学分类
二、代谢组学及其应用
（一）概述与原理
（二）研究层次与方法
（三）生物信息学分析方法
（四）常见样本准备
参考文献
第二十二章　动物与细胞实验的系统评价与Meta分析
一、动物与细胞实验系统评价的现状与意义
二、动物与细胞实验系统评价的基本过程
（一）计划书的制定与发布
（二）动物和细胞实验系统评价实施步骤
三、动物与细胞实验的检索策略的制定
（一）确定检索因子
（二）确定主题词
（三）确定自由词
（四）主题词和自由词的结合
（五）检索式的最终确定
四、动物和细胞实验的偏倚风险评估
（一）动物实验的偏倚风险评估
（二）细胞实验的偏倚风险评估
五、数据分析
（一）软件介绍
（二）数据分析的注意事项
（三）动物与细胞实验系统评价的相关分析举例
参考文献

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细胞自噬检测方法

2026年07月08日

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第十六章　细胞自噬检测方法

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