冷冻切片技术

（1）取材：新鲜处理组织，干纱布或滤纸擦干，以防形成冰晶造成切片中形状不一的空泡，使细胞结构移位。

（2）标本托上涂一层冷冻包埋剂OCT，然后将新鲜标本放在标本冷冻托上并用OCT包埋剂覆盖。(https://www.daowen.com)

（3）将冷冻组织固定在切片机的机头上，调整机头位置，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。

（4）调好切片厚度，根据不同组织而定，一般为5～10μm。

（5）常用固定液有丙酮、10%中性福尔马林缓冲液、乙醚、A-F液等。

（6）冷冻切片苏木精-伊红（HE）染色法：①冷冻切片立即放入固定液中，固定1 min，水洗；②入苏木精染液，水洗，1%盐酸乙醇分化数秒，水洗；③入伊红染液1～2 min，水洗；④70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇逐级脱水，无水乙醇脱水2次；⑤二甲苯透明2次，中性树胶封固。