（五）免疫磁珠法

（五）免疫磁珠法

在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，将这些结合了磁珠的细胞置于强大的磁场下，便会与其他未被结合的细胞分离，而磁珠脱离磁场后磁性立即消失，这样就可以筛选或去除所标记的细胞，从而达到选择细胞的目的。

1.实验原理 外泌体表面具有特异性标志物，与连接在磁珠上的特异性单抗结合后，在外磁场中，通过抗体与磁珠相连的外泌体被吸附而滞留在磁场中，而不具有特异性标志物的物质不能与磁珠上的单抗结合，无法在磁场中停留，从而达到分离的目的。

2.主要材料和设备 1×PBS，包被特异性抗体的磁珠，磁力架，无菌离心管；低温台式离心机，摇床。

3.操作流程 以提取细胞培养上清液中的外泌体为例。

（1）收集20 ml细胞培养上清液，置于无菌离心管中。

（2）4℃，2 000 g离心10 min，同一条件下再次离心，取上清液备用。

（3）使用1×PBS清洗磁珠5次。

（4）将清洗后的磁珠用磁力架进行分离。

（5）将备用的上清液加入磁珠中，轻轻混匀。(https://www.daowen.com)

（6）4℃，将上述混合液置于摇床轻轻混匀24 h。

（7）使用磁力架收集磁珠，随后用1×PBS清洗磁珠至少3次。

（8）使用10 ml 1×PBS清洗磁珠1次。

（9）用100μl 1×PBS重悬磁珠，备用。

4.优缺点 操作简单，特异性高，能获得形态完整的外泌体，但回收效率低。p H 和盐浓度会影响外泌体的生物学活性，不便后续实验，而获得的外泌体仅仅是标志物阳性的亚群。磁珠价格高昂，成本较高。

5.注意事项

（1）基于较大的接触面积和良好的扩散性，免疫磁珠法分离能较有效地捕获特定的外泌体亚群。

（2）磁珠上包被的特异性单抗对外泌体亚群的分选起着决定性作用。