质粒和PCR产物的酶切实验

（1）一般质粒酶切鉴定均可用10～20μl反应体系，切割的质粒可多可少，一般鉴定的话只需要500～1 000 ng质粒即可。根据实验要求，可进行单酶切或双酶切反应。酶切反应产物如需进行下游连接实验，则可以扩大反应体系（如酶切50μl或100μl），按所使用的限制性内切酶的用法增加加入的量即可。体系如表12-2。

表12-2　双酶切反应体系

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（2）配制好以上反应体系后，使用移液器充分混匀，并瞬时离心将所有液体离心到管底。（3）按照不同内切酶的最适反应温度（如37℃水浴）反应0.5～1 h。

（4）充分酶切后，进行琼脂糖凝胶电泳并使用凝胶成像分析系统分析酶切效果。