蛋白质免疫印迹实验注意事项

（1）电泳时正负极不能弄错。在电泳装置中，默认黑色为负极、红色为正极。蛋白质从负极泳向正极。

（2）电泳结束剥胶动作要轻，避免将胶撕破。

（3）注意安装转膜装置的顺序（黑色板—海绵—滤纸—凝胶—杂交膜—滤纸—海绵—透明板），并完全排除气泡。如安装转膜装置时没有完全赶走气泡，将造成电泳条带转印不齐（图9-10）。

图9-10　转膜时有气泡造成条带不整齐(https://www.daowen.com)

（4）为了便于辨别条带顺序，转膜结束时在膜上剪角（如左上角或者右上角）以区分正反上下。

（5）若使用PVDF膜需临用前用甲醇浸泡以活化PVDF膜。但目前市售商品已有不需甲醇活化的PVDF膜。

（6）需要合适的一抗、二抗比例，否则会出现条带信号很弱或没有、非特异性条带等现象。

（7）在进行一抗、二抗孵育后，必须将转印膜进行充分的洗涤，否则会造成背景过深、条带不清晰的现象。