(三)沉淀法
沉淀法是基于某些中药化学成分能与特定试剂生成沉淀,或加入某些试剂后可降低某些成分在溶液中的溶解度而使其自溶液中析出的一种方法。如果目标成分被沉淀,则这种沉淀反应必须是可逆的;如果是不需要的成分,则可将生成的沉淀滤过除去,以达到除杂的目的。根据沉淀过程中应用的溶剂类型不同和具体操作的原理不同,沉淀法又分为专属试剂沉淀法、分级沉淀法等。
1.专属试剂沉淀法 利用某些试剂选择性地沉淀某类型成分,即为专属试剂沉淀法。如雷氏铵盐试剂能沉淀季铵碱类,可用于季铵碱与其他生物碱类成分的分离;胆甾醇试剂能与甾体皂苷形成稳定沉淀,从而可使其与三萜皂苷分离。另外,明胶能沉淀鞣质类成分,可用于分离或除去鞣质。
2.分级沉淀法 在混合组分的溶液中逐步加入定量的与该溶液能互溶的溶剂,通过梯度改变混合组分溶液中某些成分的溶解度,使其逐步从溶液中析出的方法称为分级沉淀法。如在含有糖类或蛋白质的水溶液中,分次加入乙醇,使含醇量逐步提高,可逐渐沉淀出分子量由大到小的蛋白质、多糖、多肽等;在含皂苷的乙醇溶液中分次加入定量的乙醚或乙醚-丙酮混合液,可使皂苷类成分依据极性的差异分级沉淀出来。
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图14-1 中药水提醇沉流程图
(1)水提醇沉法:在浓缩的中药水提液中加入数倍量的乙醇稀释,沉淀除去多糖、蛋白质等水溶性杂质。基本原理是:利用中药中的大多数成分如生物碱盐、苷类、有机酸类、氨基酸、多糖等易溶于水和醇的特性,用水提出,并将其提取液浓缩,加入适当的乙醇反复数次沉降,除去其不溶物质,最后得到澄明液体。乙醇含量达到50%~60%时,可以沉淀淀粉等物质;乙醇含量达到75%时,可以沉淀蛋白质等物质;乙醇含量达到80%时,可以沉淀蛋白质、多糖、无机盐等物质(图14-1)。
(2)醇提水沉法:是用适宜浓度的乙醇提取药材成分,回收乙醇后,用水除去提取液中杂质的方法。其基本原理与操作大致与水提醇沉法相同,不同之处是乙醇提取可减少黏液质、淀粉、蛋白质等杂质的浸出,同时在乙醇中溶解度大而在水中溶解度小的杂质则可沉淀除去。乙醇浓度在90%以上时,可以提取中药材中的挥发油、树脂等成分;乙醇浓度在70%~80%时可以提取中药中的生物碱及部分生物碱成分;乙醇浓度在60%~70%时,可以提取中药材中的苷类成分;乙醇浓度在45%时可以提取中药材中的鞣类成分;乙醇浓度在20%~35%时可以提取中药材中的水溶性成分。