抗体和靶蛋白的结合

一般蛋白质免疫印迹膜的检测分两步进行：首先靶蛋白特异性的非标记抗体在封闭液中先与杂交膜一同温育。经洗涤后，再将膜与经标记的抗免疫球蛋白抗体（二抗）即二级试剂一同温育。二级试剂经放射性同位素标记，或与辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）偶联。进一步洗涤后，通过放射自显影或原位酶反应来确定抗原-抗体-抗体在膜上的位置。这种两步检测法主要优点是使用单个二级试剂可测定多种多样的第一抗体，从而免去了逐一纯化并标记各种第一抗体之累。(https://www.daowen.com)