分子克隆的基本工具

DNA重组技术发展自20世纪70年代，经历了3个时期。①在生物化学时期，发现了包括可产生DNA分子的互补末端，利用T4连接酶将它们连接起来，并用来转化细菌。分离出限制性内切酶EcoR Ⅰ，能切开特定DNA序列，并切出特定的黏性末端。②在分子遗传学时期，发现利用抗生素筛选法可以在大肠埃希菌内稳定地转移高浓度的抗生素抗性基因，并利用内切酶EcoR Ⅰ得到黏性末端，用T4连接酶能把外来DNA 插入到质粒中。③在第三个时期，各种质粒载体的发展极大地便利了细菌的基因克隆，包括大肠埃希菌及与大肠埃希菌亲缘关系较远的革兰阴性菌、革兰阳性菌在内，还发展了至今广泛用于植物基因工程的根瘤农杆菌Ti质粒。(https://www.daowen.com)