（一）形态学检测
凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞可出现皱缩、变圆、脱落的现象。
1.光学显微镜观察 有凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。常用姬姆萨染色（Giemsa，也称天青-伊红染色）、瑞氏染色（也称伊红-亚甲蓝染色）等。
（1）试剂配制
姬姆萨染液：姬姆萨染料0.8 g，加入50 ml甲醇，加温至58℃，搅拌约2 h待染料彻底溶解后，缓慢加入50 ml甘油，充分摇匀，置37℃温箱中保温8～12 h。置棕色瓶中密封保存，即为Giemsa原液，一般在12～24 h后即可使用。临用时，取1 ml Giemsa原液与10 ml PBS混合，即为工作液。
瑞氏染液：瑞氏染料1 g，甲醇600 ml。
（2）操作步骤：接种细胞到12孔板；37℃，5%CO2培养箱培养24 h；对照组细胞加入PBS，实验组细胞中加入相应的诱导凋亡试剂。药物作用24 h后弃去上清液，PBS小心浸洗2次，甲醇固定15 min；去固定液，PBS洗2遍，加姬姆萨染色或瑞氏染色液，染色5 min；清水冲洗；倒置显微镜下观察拍照。
（3）注意事项：姬姆萨染色或瑞氏染色液均有成品可购买；缓冲液的p H 对染色效果影响较大；如果染色较浅可进行复染。
2.荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察 常用的DNA特异性染料有双苯并咪唑（Hoechst）、4′，6′-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）和碘化丙啶（PI）。Hoechst是与DNA 特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1 mg／ml的浓度，使用时用PBS稀释，终浓度为10μg／ml；DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色，储存液用蒸馏水配成1 mg／ml的浓度，使用终浓度一般为10μg／ml；PI不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞能够透过细胞膜而将细胞核染红。(https://www.daowen.com)
（1）操作步骤：准备细胞爬片和12孔板；接种细胞到12孔板（含有爬片）；37℃，5%CO2培养箱培养过夜，使细胞融合度约为70%；对照组细胞加入PBS，实验组细胞中加入诱导凋亡的试剂或药物，药物作用24 h；弃去上清液，用PBS小心清洗2次，加入0.5 ml固定液，固定15 min；去固定液，PBS洗2遍，加Hoechst染料（终浓度为10μg／ml）染色10 min；滴1滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的爬片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡；荧光显微镜观察拍照。激发波长350 nm 左右，发射波长460 nm 左右。
（2）结果分析：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为3期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体（图15-1）。
（3）注意事项：荧光显微镜下观察细胞时，由于荧光易淬灭，观察时要尽量快。
3.电子投射显微镜 在透射电镜下，凋亡细胞体积变小。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei），染色质高度盘绕，出现许多空泡结构；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；凋亡晚期出现核解体，产生凋亡小体。
注意事项：无法定量（电镜一个视野仅能观察一两个细胞）；实验步骤烦琐（固定、切片到拍照）；并非所有实验室都能配备电镜，具有局限性。
图15-1 细胞凋亡过程中核染色质变化（DAPI染色）