目标DNA 序列的PCR 法克隆和酶切法亚克隆

克隆目标DNA序列的方法主要有PCR法和酶切法两种。在获得某段DNA的序列结构信息和时空组织表达信息后，就可以通过设计特异的、带有特定酶切位点序列的5′上游扩增引物和3′下游扩增引物将其扩增出来，称为PCR 克隆法（PCR cloning）。可从基因组DNA、mRNA逆转录后得到的cDNA文库进行PCR克隆；也可将带有目的序列的供体质粒（donor plasmid）作为模板，通过设计引物，将目的序列从这一质粒上扩增出来，再通过酶切法或同源重组的方法将目的序列连接到另一目标受体质粒（recipient plasmid）上。当供体质粒的目的序列两侧和受体质粒的多克隆位点上包含相同的两个酶切位点（有时也会用到单酶切位点），而目的序列中没有这两个酶切位点时，可通过酶切的方式将目的序列从供体质粒上切割下来，再通过凝胶纯化、连接反应将其直接连接到受体质粒上，这种克隆方法称为亚克隆（subcloning）。常常将通过PCR方法从供体质粒向目标受体质粒转移目标DNA序列的方法称为亚克隆。(https://www.daowen.com)