质粒转化与平板筛选

（1）从-80℃冰箱取1支100μl感受态细胞放到冰上进行解冻（也可以使用手掌握住管子进行解冻，解冻后的细胞再放到冰上）。

（2）使用无菌枪头吸取全部或部分连接产物加入到感受态中，轻轻指弹混匀，冰上放置15 min。

（3）将管子放在42℃水浴锅中，静置孵育90 s。(https://www.daowen.com)

（4）将热激处理的管子转移到冰上，放置3 min。

（5）向管中加入900μl不含抗生素的LB液体培养基，混匀后37℃摇床220 rpm 振荡培养45 min，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因。

（6）吸取100μl菌液到已37℃预热5 min的含有相应抗生素的LB固体培养平板上，用三角玻棒涂匀后倒置37℃过夜培养（12～16 h）。注意培养时间不要太长，否则很容易在单克隆菌落周围出现小的卫星菌落，这些卫星菌落是一些不需要的杂菌，会影响单克菌落挑取操作。