（四）质粒抽提

商品化试剂盒中，分为质粒小量提取、质粒中量提取、质粒大量提取3种类型。这3种试剂盒的操作原理完全相同，区别仅在于裂解的菌液总体积和抽提到的质粒总量不同。一般的酶切、测序、小规模的转染实验使用小抽试剂盒即可达到实验所需的量；如果质粒用来进行病毒包装和细胞感染，或实验中需要大量使用质粒，则选取大量提取且可去除内毒素的大提试剂盒进行。下面以“高纯度质粒小提试剂盒（CW0500S，50 preps）”为例，说明常规的质粒抽提操作过程。

（1）取1～5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，13 000 rpm 离心30 s收集菌体沉淀，尽量吸弃上清液。

（2）向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1（确保P1中已加入Rnase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。

（3）向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4～6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮黏稠。不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。

（4）向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8～10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。13 000 rpm 离心5 min。(https://www.daowen.com)

（5）将步骤4中所得上清液转移到已装入收集管的吸附柱中，13 000 rpm 离心30 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

（6）向吸附柱中加入150μl Buffer PB，13 000 rpm 离心30 s。

（7）向吸附柱中加入400μl Buffer PW（确保其中已加入无水乙醇），13 000 rpm 离心1 min，倒掉收集管中的废液。

（8）将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入50～100μl的无菌H2 O，室温放置2 min。13 000 rpm 离心1 min，将质粒溶液收集到离心管中，-20℃长期保存。