高效液相色谱分离原理

高效液相色谱法的分离原理是：采用高压输液系统，将不同极性的1～2种溶剂作为流动相（mobile phase）泵入装有固定相（station phase）的色谱柱，溶于流动相的各组分经过固定相时与固定相产生不同的强弱作用（分配、吸附、亲和、排阻），组分与流动相的作用力为向前移动的动力，组分与固定相的作用力为向前移动的阻力，动力与阻力的差值的不同使其在色谱柱中滞留时间不同，从而先后从色谱柱中流出，通过检测器显示相应的信号，信号形成色谱峰，色谱峰的面积与对应组分的量呈一定线性关系。其中，将固定相极性大于流动相的液相色谱称为正相液相色谱，相反的称为反相液相色谱。

实现色谱分离的核心部件是色谱柱，是一根填充了固相吸附颗粒的铁管；最常用的吸附颗粒是通过化学反应结合了某些基团的硅胶颗粒，这些基团主要有不同链长烷烃（C8和C18）和苯基等疏水基团，或丙胺基、氰乙基和氨基等极性基团。通常用于分子量在1 000以下的非极性小分子物质的分析和纯化。流动相由水相和有机相组成，水相多用纯水、甲／乙酸水溶液、磷酸水溶液和乙酸／磷酸缓冲盐水溶液等，有机相一般为甲醇和乙腈。(https://www.daowen.com)

根据分离原理不同，高效液相色谱可分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和凝胶色谱四大基础类型，分配色谱法是应用最广泛的一种（其原理类似于溶剂萃取的“相似相溶原理”）。具体各种色谱的原理和应用可查阅相关资料，不再赘述。