神经组织染色
神经组织主要由神经元(神经细胞)、神经胶质细胞和神经胶质纤维组成,神经组织染色可显示神经元及其尼氏小体、神经纤维胶质纤维及神经胶质细胞。
1.尼氏小体染色 甲苯胺蓝(Toluidine blue)法。
固定:4%中性甲醛或95%乙醇固定。
操作方法:①石蜡切片(厚6~8μm)脱蜡至水。②纯水洗1~2次。③1%甲苯胺蓝水溶液置于50~60℃温箱内浸染20~40 min。④纯水洗1~2次。⑤95%乙醇迅速分化。⑥无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
结果:尼氏小体呈紫蓝色,胞核呈棕红色。(https://www.daowen.com)
2.神经元及神经纤维染色 Bielscbowsky Roger-Foot改良法。
固定:4%中性甲醛溶液。
试剂配制:①氢氧化铵乙醇液:氢氧化铵2 ml,95%乙醇100 ml。②胺银溶液:取20%硝酸银水溶液20 ml,滴加氢氧化铵数滴,不断震荡,直至形成沉淀刚好溶解,再滴入10滴氢氧化铵,最后加纯水至40 ml,过滤使用。③草酸甲醛水溶液:草酸2 g,甲醛(38%~40%)1 ml,纯水100 ml。
操作方法:①石蜡切片脱蜡至水。②氢氧化铵乙醇液处理12~24 h。③80%乙醇液速洗1次。④30℃温箱内直接用40%硝酸银水溶液暗处浸染20 min。⑤纯水洗1~2次。⑥20%甲醛水溶液还原3~5 min,50%甲醛水溶液再次还原3~5 min。⑦滤纸吸干切片周围水分,胺银溶液滴染1~3 min。⑧用滤纸轻轻吸去胺银溶液后,20%甲醛溶液还原3~5 min,至切片呈棕黄色。⑨纯水洗2~3 min,0.2%氯化金水溶液滴染至切片呈灰黑色。⑩纯水洗1~2次,草酸甲醛溶液强化处理5 min。[11] 纯水洗3~5 min,5%硫代硫酸钠水溶液3~5 min。[12] 纯水洗2~3 min,95%乙醇及无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。
结果:神经元及神经纤维呈灰黑色。