（一）实验原理

（1）一旦细胞从正常的体内环境转成体外培养后，细胞的活性特别是在实验操作期间的活性便成为一个需要考虑的问题。任何体外培养的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞很困难。

（2）许多体外实验是为了了解所研究的化学物质的潜在细胞毒性，这些化学物质常常被用作药物，因此证明这些化学物质在特定的浓度范围内没有细胞毒性是这一类实验的关键目的。

（3）台盼蓝染色法：能够区分培养物中的活细胞和死细胞，它基于染料排斥原理，即具有完整细胞膜的细胞能够排斥染料进入细胞（不被染成蓝色），而死细胞因为细胞膜发生结构变化可以吸收染料而呈现蓝色着色（图5-12）。

图5-12　台盼蓝染色后的细胞(https://www.daowen.com)

（4）MTT比色法：活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶可以将外源性MTT（四唑盐）还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。用二甲基亚砜（DMSO）溶解细胞中的甲瓒后，用酶标仪在570 nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量（图5-13）。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

图5-13　MTT比色法的原理和操作过程

（5）CCK-8法：为Cell Counting Kit-8的简称，是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度、无放射性的比色检测法。CCK-8属于MTT的升级产品，CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，检测快速，毒性非常低。CCK-8的原理基于水溶性四唑盐WST-8，WST-8在电子偶合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的甲瓒染料。甲瓒染料能够溶解在组织培养基中，与活细胞数量成正比。