（二）固定
用固定剂与组织内的蛋白质反应，使组织持久保存于接近存活时的代谢状态，并耐受后续处理。目前，4%中性甲醛（或称10%中性福尔马林）是公认的应用范围最广的固定液之一。它对大多数病理标本具有良好的固定作用，穿透速度快，组织硬化小。小标本的固定时间为4～6 h，大标本为18～24 h或更久。固定液量应为组织总体积的5～10倍以上。
1.固定剂的分类
（1）单纯固定液
1）甲醛（formaldehyde）：固定浓度：10%～20%水溶液；固定时间：12～24 h。固定后处理：流水冲洗12～24 h。配置方法：甲醛原液10～20 ml+生理盐水（或纯水）80～90 ml。特性：甲醛原液浓度为40%，放置时间过长易产生白色沉淀“三聚甲醛”，氧化后变为甲酸，需长期保存甲醛溶液需加入适量的碳酸镁或碳酸钙。
2）乙醇（ethylalcohol）：固定浓度：80%～90%乙醇；固定时间：依据组织块大小和乙醇浓度而定，一般4～12 h。固定后处理：直接脱水。配置方法：无水乙醇80～90 ml+纯水10～20 ml。特性：50%以上浓度的乙醇可溶解组织内脂肪、类脂体和色素等，故不能固定上述物质。70%～80%乙醇可作为组织固定后的保存剂。
3）丙酮（acetone）：固定浓度：原液；固定时间：4℃冰箱2～8 h。固定后处理：直接脱水。特性：能与水、醇、氯仿等多种试剂任意比例混合，广泛用于组织化学中对酶（磷酸酶及氧化酶）的固定。
（2）混合固定液
1）中性甲醛液：配制方法：40%甲醛100 ml+纯水900 ml+磷酸二氢钠（NaH2 PO4）4 g+磷酸氢二钠（Na2 HPO4）6.5 g，p H 7.0，固定时间24 h。固定后处理：流水冲洗24 h。适用于多种组织固定。
2）乙醇-甲醛液（A-F液）：配制方法：95%乙醇90 ml+40%甲醛10 ml。固定时间：组织块固定4～12 h，铺片固定5～10 min。固定后处理：直接脱水。适用于皮下组织中的肥大细胞、组织化学中对糖原的固定等。
3）Bouin液：配制方法：饱和苦味酸水溶液75 ml+40%甲醛25 ml+冰醋酸5 ml。固定时间12～24 h，固定后处理：用70%乙醇浸洗除去苦味酸的黄色。适用于固定皮肤组织。
4）Carnoy液：配制方法：冰醋酸10 ml+氯仿30 ml+无水乙醇60 ml。固定时间20～40 min，较大材料不超过2～4 h。固定后处理：直接脱水。适用于糖原、染色体和尼氏体等。
5）Verhoeff液：配制方法：40%甲醛10 ml+95%乙醇48 ml+纯水36 ml+苦味酸1 g。固定时间48 h。固定后处理：直接脱水。适用于眼球组织。
6）Zenker液：升汞5.0 g，重铬酸钾2.5 g，纯水100 ml，冰醋酸5 ml。将升汞、重铬酸钾一起置于纯水中，加温至40～50℃，使其溶解。冷却后过滤，储存于棕色瓶中，使用时取此液95 ml再加入冰醋酸5 ml既可。此液p H 为2.3。(https://www.daowen.com)
2.固定剂的作用
（1）防止自溶与腐败：抑制内外源性酶，并改变组织成分的化学性质以耐受酶解。
（2）阻止溶解和损失：稳定蛋白质骨架，进而阻止其他物质的溶解。
（3）硬化作用：可增加组织硬度。
（4）增强染色：改变各种细胞和组织成分的析光率，增强组织的析光指数，促进染色。
3.组织固定的基本方法
（1）直接固定
1）将组织块直接投入相应的固定液中。
2）微小组织或液体沉淀物：先用滤纸包裹，然后放入专用小盒内进行固定。
（2）灌注固定
1）局部灌注固定：肾脏和肝脏可从其动脉注入固定液，同时剪断其静脉以利血液流出。眼球可从眼后房注入固定液。肺脏可从气管或支气管注入固定液，注入时速度要平缓，用量要适当，以免胀破肺泡。脑组织从颈动脉朝向头部方向进针注入固定液，同时剪开对侧颈静脉或左心房以利血液流出。经局部灌注固定的器官取下后投入相同的固定液中进行后固定。
2）全身灌注固定：动物麻醉后，手术剪开心包膜，在主动脉弓下穿进一根纱线备用，从左心室向主动脉弓方向进针，随即用穿好的纱线固定针头，剪开右心耳放血，先注入生理盐水，观察右心耳流出的液体呈无色时，换成4%中性甲醛溶液，约30 min后停止。取下组织后用4%中性甲醛溶液固定12～24 h。