动物体内实验自噬分析

自噬在活体动物内是动态变化的。若无诱导因素或条件存在，生物体仅维持基础自噬，且持续时间极为短暂，在体监测非常困难。目前动物的自噬分析方法主要包括以下三大类。

1.加入诱导因素 给予饥饿、缺氧或雷帕霉素等处理，诱导动物组织或细胞发生自噬；或给予3-MA处理抑制细胞自噬体形成；或给予氯喹处理提高自噬体p H，以抑制自噬体与溶酶体的融合，再结合荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察，通过计数自噬体或自噬溶酶体等的数量监测自噬。也可于取材制片后采用电子显微镜观察自噬结构的形态和数量变化，可结合免疫染色，标记LC3、p62和Beclin-1（BECN1）等自噬相关蛋白质，开展免疫电镜研究，进行定性或定量分析。(https://www.daowen.com)

2.应用GFP-LC3转基因小鼠等模式动物实时监测自噬流的变化情况 该方法需要动物活体成像或激光共聚焦显微镜等设备的支持。仅仅使用活体动物进行在体研究还不足以反映自噬流的活化或抑制情况，还必须结合其他方法，如电子显微镜、蛋白质免疫印迹或其他免疫染色的结果共同判断。若各种检测方法的结果趋于一致，才能表明自噬的在体变化。

3.构建自噬相关基因敲除的模式动物 目前，ATG3、ATG4B、ATG4C、ATG5、ATG7、ATG12、ATG13、自噬相关基因16样蛋白1（autophagy related 16 like 1，ATG16L1）、unc-51样自噬激活激酶1（unc-51 like autophagy activating kinase 1，ULK1）、RB1诱导卷曲螺旋蛋白1（RB1-inducible coiled-coil 1，RB1CC1）、p62、BECN1等许多基因敲除小鼠均已被成功构建，且上述基因在自噬中发挥的功能也已部分被阐明。上述自噬相关基因敲入或敲除模式动物的建立为自噬的在体和体外研究提供了有益工具，同时也促进了体外研究结果的在体验证。