亲和免疫细胞化学技术
亲和物质为具有多价结合能力的物质，包括生物素、亲和素和葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A，SPA）等。亲和物质之间不仅具有高度亲和力，而且可与酶、荧光素、同位素和铁蛋白等结合。免疫细胞化学与细胞生物学及生物化学紧密结合，将亲和物质引入免疫细胞化学中，形成亲和免疫细胞化学技术。
1.抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术（avidin biotin-peroxidase complex technique，简称ABC法） 其特点是利用亲和素与生物素具有高度亲和力这一生物学性质，将生物素与酶结合形成生物素化HRP，然后用生物素化HRP与亲和素按一定比例混合，形成复合物（ABC），ABC再与生物素化抗体（二抗）结合，最后底物显色（图10-8）。
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图10-8 ABC法示意图
操作步骤：①石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3次，各3 min。②0.3%H2 O2甲醇处理切片10～20 min。③PBS洗3次，各3 min，适当进行抗原修复。④用稀释的正常灭活兔／羊血清孵育15～20 min。⑤滴加适当稀释的第一抗体4℃过夜。⑥PBS洗3次，各3 min，加生物素标记的第二抗体，37℃孵育40 min。⑦PBS洗3次，各3 min。⑧ABC复合物[（1∶100）～（1∶150）]，37℃作用40～50 min。⑨PBS洗3次，各3 min。⑩用0.05%DAB-0.03% H2 O2液显色。[11] 复染，封片、观察。
结果：阳性反应为棕褐色沉淀。
2.链霉抗生物素蛋白-生物素免疫染色（strept avidin-biotin immunostaining，S-P法）又称为链霉亲和素-生物素免疫染色，是用链霉亲和素（streptavidin）取代ABC中的生物素，将链霉亲和素与同一浓度的生物素化过氧化物酶混合后，即形成链霉亲和素-生物素-酶复合物，用生物素标记的第二抗体与链霉亲和素连接的过氧化物酶及其基质混合液来检测细胞或组织中的抗原（图10-9）。S-P法敏感性高，其信号的放大效应远超过ABC法。
图10-9 S-P法示意图
操作步骤：①石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3次，各5 min。②0.3%H2 O2甲醇处理切片10～20 min。③PBS洗3次，各3 min，适当进行抗原修复。④用稀释的正常灭活兔／羊血清孵育15～20 min。⑤加入适当稀释的一抗，孵育60 min。⑥PBS洗3次，各3 min。⑦加入生物素标记的二抗，孵育10 min。⑧PBS洗3次，各3 min。⑨加入链霉亲和素-过氧化物酶溶液，孵育10 min。⑩PBS洗3次，各3 min。[11] 加入新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3～10 min。[12] 自来水冲洗，苏木精复染，中性树胶封固。
结果：阳性部位为棕黄色沉淀，胞核呈淡蓝色。