线粒体膜电位检测细胞凋亡
线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位（Δψm）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA 断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、DiOC6、JC-1、TMRM 等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。染液终浓度为Rhodamine 123（1 m M），DiOC6（25 nM），JC-1（1 m M）和TMRM（100 nM）。
1.操作步骤（以JC-1染色为例，图15-3）
（1）对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS洗涤细胞1次，加入1 ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
（2）加入1 ml JC-1染色工作液，充分混匀。
（3）细胞培养箱中37℃孵育20 min。
（4）37℃孵育结束后，吸除上清液，用染色缓冲液洗涤2次。(https://www.daowen.com)
（5）加入2 ml细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
（6）荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
图15-3 JC-1染色检测线粒体膜电位变化
2.注意事项 始终保持平衡染液中p H 的一致性，因为p H 的变化将影响膜电位；与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白质，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。
3.JC-1特点 在线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质（matrix）中形成聚合物（J-aggregates），可产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体（monomer），可产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。